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PCR反應假陽性結果產生原因及解決方法2024/03/11

假陽性是指出現的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。產生的原因有：①引物設計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產物為非目的序列；②靶序列太短或引物太短；③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有：操作輕柔，防止靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外造成污染；除酶及不能耐高溫的物質外，所有試劑或器材高壓消毒；離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時，可在加標本前，將反應管和試劑用紫外光照射，以破壞存在的核酸。

PCR反應三步循環播放過程介紹2024/03/04

PCR過程分三步：變性--退火--延伸，PCR中會對這三步循環播放。1.變性在開始準備變性的過程中，要慢慢加熱混合物，加熱混合物時，兩條鏈間氫鍵會融化，DNA兩股鏈會分開，就像上圖粉色的部分。如果混合物熱的情況下，引物不會和DNA黏在一起，兩條DNA鏈也不會黏在一起。2.退火接下來混合物慢慢的冷卻，這時引物會黏在DNA上，因為引物較小，更容易漂浮起來，和DNA結合。溫度控制在54攝氏度左右可以保證引物序列和DNA互補配對，而DNA雙鏈不會黏在一起。3.延伸這一步我們需要一個幫助DNA復制的工具，

大鼠elisa分析檢測試劑盒實驗環境控制2024/02/26

ELISA利用抗原抗體之間專一性結合之特性，對標本進行檢測；由于結合與固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性，因此設計其結合機制後，配合酵素顯色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用顯色之深淺進行定量分析。確保ELISA試劑盒實驗成功的七個環境因素：1.為推遲光學部件的老化，應避免陽光直射。2.操作環境溫度應在15℃至40℃之間，環境濕度在15%~85%之間。3.儀器應放置在噪音低于40分貝的環境下。4.操作時電壓應堅持穩定。5.操作環境空氣清洗，避免水汽、煙塵。6.

培養基的購置與驗收介紹2024/02/18

培養基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。下面介紹培養基的購置與驗收：1.購置從培養基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養基的供應企業進行評價后選擇合格的供應商，這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體系的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供：培養基成分名稱及

?細胞培養步驟2024/02/05

細胞培養步驟：一．培養基及培養凍存條件準備：1）準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO31.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。二．細胞處理：1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在100

動物血清在細胞培養中的主要作用2024/01/29

細胞培養（cellculture）也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必須的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。培養細胞用的培養基為人工合成，但動物細胞生活的內環境還有一些成分尚未研究清楚，加入動物血清是為了給體外培養的細胞提供一個類似生物體內的環境，此外動物血清中也包含了一些動物的激素和酶,可以促進細胞的發育。主要作用有：(1)提供基本營養物質：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞

RT-PCR 實驗中的逆轉錄酶的三種活性介紹2024/01/22

逆轉錄酶是存在于RNA病毒體內的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實驗中的逆轉錄酶需要具有以下三種活性：1.依賴RNA的DNA聚合酶活性：以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈；2.Rnase水解活性：水解Rnase雜合體中的RNA;3.依賴DNA的DNA聚合酶活性：以一條DNA鏈為模板合成互補的雙鏈DNA在選擇逆轉錄酶時，建議選擇無RNaseH①活性（RNaseH-）的逆轉錄酶。具有RNaseH活性的逆轉錄酶的RNaseH活性會與聚合酶活性競爭RNA模板與DNA引物（或cDNA延伸鏈）形成的

小鼠脂蛋白α（Lp-α）elisa檢測試劑盒?操作要點2024/01/15

小鼠脂蛋白α（Lp-α）elisa檢測試劑盒操作要點:1、標本的采取和保存：可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標本；2、試劑的準備：所需試劑、蒸餾水、去離子水、自配的緩沖液；3、加樣：一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。4、保溫：ELISA中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加

培養基的性能檢測要點2024/01/08

培養基的性能測試1.外觀控制制備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化，是否蒸發/脫水。2.污染控制從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗)，確定無微生物生長方可使用。3.性能測試(1)測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩定特性并能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株，應來自國際/菌種保藏中心ATCC標準菌株，菌株的選擇參考衛生WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。(2)定量測試方法（改良Mi

大鼠血管粘附蛋白1（VAP-1）elisa定量檢測試劑盒變質詳細分析2024/01/02

ELISA試劑盒變質是ELISA實驗中比較常見的問題，影響ELISA試劑盒變質詳細分析如下幾點：1、方法學的影響ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時差所引起的bu公平競爭等因素的影響，結果重復性較差，質量較難控制。2、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質量*一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執行

PCR反應污染詮釋2023/12/25

PCR擴增產物污染，這是PCR反應中最主要最常見的污染問題，所以，擴增區的儀器什么如槍頭等要注意。還有一種容易忽視，最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染；在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染.據計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。1.標本處理區，包括擴增摸板的制備；2.PCR擴增區，包括反應液的配制和PCR擴增；3.產物分析區，凝膠電泳分析，產物拍照及重組克隆

髓鞘相關糖蛋白a/b抗體實驗原理2023/12/18

髓鞘相關糖蛋白a/b抗體實驗原理:1、特異性結合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合，直接發揮中和病毒的作用。2、活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。3、結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，參與免疫應答。4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎兒血流中

血小板反應蛋白抗體操作步驟2023/12/11

操作步驟:1.脫蠟水化。將石蠟切片置于新鮮二甲苯脫中浸泡15分鐘,重復三次。去除多余的液體后,依次置于無水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡5分鐘,蒸餾水(或自來水)沖洗5分鐘。用PBS緩沖液(試劑1,將干粉溶解于1L去離子水中)沖洗切片5分鐘,重復三次。2.抗原修復。將脫蠟水化后的組織切片置于燒杯(或修復盒)中的耐高溫塑料切片架上,加適量修復液1×檸檬酸鈉抗原修復液(試劑2,將100×檸檬酸鈉抗原修復液加去離子水稀釋成1×檸檬酸鈉抗原修復液),液面要浸過切片組織一定高

轉染三類途徑簡介2023/12/04

轉染的途徑大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類：1.物理介導：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例。2.化學介導：方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術。3.生物介導：方法有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，

抗體實驗原理分享2023/11/28

實驗原理:1、特異性結合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合，直接發揮中和病毒的作用。2、活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。3、結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，參與免疫應答。4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫

小鼠黑色素瘤細胞培養操作2023/11/20

小鼠黑色素瘤細胞培養操作：1、復蘇細胞：以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4mL培養基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min，棄去上清液，加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的P

科研抗體實驗原理介紹2023/11/13

實驗原理:1、特異性結合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發揮效應以清除病原微生物或導致病理損傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結合，直接發揮中和病毒的作用。2、活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。3、結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，參與免疫應答。4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫

試驗室中化學試劑正確保存的辦法2023/11/06

化學試劑既要保管好試劑不使蛻變或損耗，又要留意危險性試劑的du害效果，防止火警、損害以及放射性污染等事端的發作。想要試驗做的好，那么化學試劑一定要保存的好，萬一出現個什么不小心，那不便是浪費了化學試劑，有耽誤了自己做試驗的時刻，那么以下總結的試驗室中化學試劑怎么正確保存的辦法。一、避光其實在試驗室中許多化學試劑見強光都極易揮發蛻變，所以為避免試劑遭到光的輻射，應選用棕色玻璃瓶，外用黑紙包裹，并儲藏于暗室或遮光的試劑柜中。避光保存適用于能進行光化學反響的試劑，如胺類、酚類、醛類等。二、低溫為了使試

實時熒光定量PCR技術方法探討2023/10/30

根據所使用的技術不同，實時熒光定量PCR可以分為：熒光探針和熒光染料兩種方法。現將其原理簡述如下：1.TaqMan熒光探針TaqMan探針法是高度特異的定量PCR技術，其核心是利用Taq酶的3'→5'外切核酸酶活性，切斷探針，產生熒光信號。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的3'→5'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光

ELISA檢測試劑盒操作過程注意事項2023/10/23

ELISA檢測試劑盒操作過程注意事項：1加樣：①實驗樣本過多時，可分批次操作，以減少實驗時間延長造成的誤差；②加酶試劑后，用吸水紙吸干孔外試劑；③作定量試驗時，使用加樣器加注試劑，并經常校正其準確性，此外，要做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。2.溫育：①如有兩種溫度，盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件；②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察；③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”，因此盡量采用水浴；3.洗板：①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不