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渾濁紅球菌的培養2023/10/17
渾濁紅球菌的培養:1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業發酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續挑取少許,接入瓊脂斜面培養基上,在25℃(或較高溫度
細胞傳代密度問題與解決方案2023/10/08
細胞傳代密度問題與解決方案:1.傳代密度過高一旦細胞養太久至融合度過高(90%)才傳代,容易使細胞產生老化現象,甚至是堆疊,再消化細胞時不易吹打成單顆細胞,即便再重新鋪盤傳代,細胞也無法回到原本的特性了。(如:單層細胞,沒長滿就發生堆疊現象)解決方案:盡量避免融合度過高,鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代分盤。細胞融合度:在細胞培養中指的是細胞在培養表面(培養皿/瓶)所占的比例。2.傳代密度過低哺乳動物貼壁培養細胞,若細胞培養到80-90%密度需要開始傳代,在傳代接種細胞密度過低,細胞間距離太遠
?單克隆抗體與多克隆抗體對比2023/10/03
單克隆抗體(monoclonalantibody,mAb):就是指由單一B細胞(其基因僅能編碼一種抗體)克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。單克隆抗體是通過將抗原注入到宿主動物體內啟動機體免疫應答而產生的。因而制作單克隆抗體的大多數操作都是在體外將來自這些宿主的脾細胞與培養的惡性骨髓瘤細胞進行融合。將du特的細胞克隆分離出來,融合步驟中存活下來的細胞稱為雜交瘤。雜交瘤因骨髓瘤特性而可以永生,且容易在培養物中繁殖。多克隆抗體:用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物,可刺激機體多個B細
實時熒光定量 PCR (RT-qPCR)實驗之RNA提取2023/09/25
實時熒光定量PCR(RT-qPCR)實驗過程中,RNA的提取是參照全式金生物的Transzolup提取試劑盒完成的。1、離心機4℃預冷,準備試劑:氯仿、異內醇、75%乙醇(用DEPC水配制)、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管,戴口罩、帽子、無粉乳膠手套;2、取出轉染建模成功24h后的細胞,吸棄培養液,用1×PBS清洗1次;3、每10cm2生長的細胞加入1mL的TranszolUp,放置片刻后使用移液槍吹打細胞使其wan全脫落;4、用移液槍反復吹吸裂解液直至無明顯沉淀,將裂解液全部轉移
賴氨酸(Lys)含量測定試劑盒Lys含量計算2023/09/11
測定原理:蛋白質中的賴氨酸(lysine,Lys)具有一個游離的ε-NH2,它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質,其顏色的深淺在一定范圍內與賴氨酸的含量成線性關系。亮an酸與賴氨酸的碳原子數目相同,而且僅有—個游離氨基(ε-NH2),所以通常用亮an酸配制標準液。賴氨酸含量計算:a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:標準條件下測定回歸方程為y=0.0062x-0.0212;x為賴氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。1.按照蛋白濃度計算賴氨酸含量(µg/mgprot)=[(△A+0.0212)÷0.
I型膠原單克隆抗體穩定性良好原因2023/08/28
抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩定性。之所以這種抗體具有這樣良好的穩定性,主要原因有四個方面:1.抗體純度高純度的抗體產品,去除了包括各種蛋白酶在內的雜質,保證了抗體的穩定性。采用先進的抗體純化技術,確保抗體產品的高純度,保障其抗體產品的穩定性。2.抗體濃度高濃度的抗體產品可減少容器表面吸附造成的物質損失。撫生抗體產品中,93%的濃度大于0.5mg/ml。抗體產品濃度普遍大于業內水平。3.抗體的穩定性是自然界長期進化的結果抗體是免疫系統中最重要的分子之一,其穩定性是自然進化
ELISA的檢測收集標本注意事項2023/08/21
ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據,為了保證實驗數據的可靠性,在實驗過程中必須堅持全面的質量控制和全過程質量控制,在收集標本前都必須有一個完整的計劃。注意事項:1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類,如果要做復孔,標本量收集體積=100ulx檢測種類x22、樣本收集后若在一周內進行檢測可保存于2-8°C,若不及時
ELISA試驗樣本實驗前準備2023/08/17
樣本實驗前準備:ELISA進口試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。1、血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。3、尿液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集
配置常用細胞培養配套試劑詳述2023/08/07
幾種常用細胞培養配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶ye等)。1、無鈣、鎂、離子溶液(1000ml)氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫na、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氫na(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL2、PBS(Phosphate-Bufferedsaline)磷酸鹽緩沖液甲液:0.2mol/L磷酸氫二na溶液、磷酸氫二na(無水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL乙液:0.2mo
生化液體型試劑解析2023/08/01
無論是單試劑還是雙試劑型試劑,目前乃至今后仍以液體型為主要劑型。其優點是液體型試劑的試劑組分高度均一,瓶間差異小,測定重復性好而且使用方便;它也無需加入輔助試劑及蒸餾水,防止了外源性水質對試劑的影響,性能較穩定,測定結果比較準確。缺點是液體型試劑(尤其是酶試劑)保存時間較短,不便于運輸。1.液體單試劑所謂液體單試劑就是將某種生化檢驗項目所用到的試劑科學地混合在一起,組成為一種試劑。應用時,只須將標本和試劑按比例混合,即可進行相應的生化反應,然后用適當的方法檢測結果。應用十分方便。2.液體雙試劑所
PCR對照實驗結果好,目的片段不理想分析2023/07/17
對照實驗結果好,卻沒有回收到目的片段,實驗出了什么問題?參考見解:1連接用室溫保溫1小時,能滿足大多數克隆,為提高效率,需4oC過夜。2插入片段帶有污染,使3`-T缺失,或抑制連接,抑制轉化。為此,將插入片段和pGEM-T正對照混合,再連接。如降低了對照的菌落數,插入片段需純化,或重新制備。如產生大量的藍斑,插入片段污染有核酸酶,使pGEM-T或pGEM-TEasy載體3`-T缺失。3插入片段不適于連接。用凝膠純化的插入片段,因受UV過度照射,時有發生。UV過度照射會產生嘧啶二聚體,不利于連接,
?菌種的培養分析2023/07/10
菌種的培養:1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業發酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備,其中(1)~(4)為孢子制備過程。4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種,用無菌手續挑取少許,接入瓊
ELISA試劑盒特異性影響因素2023/06/26
ELISA試劑盒特異性影響因素:1、固相載體的選擇。ELISA中常用的固相載體有微量滴定板、小珠和小試管三種,以微量滴定板最為常見。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各產品的質量差異很大。因此,在選擇試劑盒同時要對其使用的微孔板型號進行認證,評估。2、包被物的純度。在酶聯免疫測定尤其是間接ELISA中,試劑的特異性取決于使用抗原的純度。目前由于技術條件的限制,包被用抗原或抗體的純度不可能達到100%
PCR反應靶序列或擴增產物的交叉污染解答2023/06/12
PCR反應出現假陽性,一是引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行PCR擴增時,擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。需重新設計引物。二是靶序列或擴增產物的交叉污染:這種污染有兩種原因:1、整個基因組或大片段的交叉污染,導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:1)、操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣器內或濺出離心管外。2)、除了酶及其他不耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及進樣槍頭均應一次性使用。3)、必要時,
ELISA實驗精確性的方法技術要點2023/06/05
免疫檢測法的精確性表現為單次實驗孔間(批內)的重復性和多次實驗之間(批間)的重復性。CV值高則表明精確度低,通常由以下兩個原因造成:移液技術和洗滌技術。一、移液技術1.移液時,槍頭應對準孔,避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性,請預先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等待片刻使體積平衡后再取出。4.移液不充分或移液體積不均,說明移液器需要校正。必要時請檢查移液器并重新校正。5.加樣時,不同的試劑標準品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。6.確保使用合適的
ELISA試劑盒的各種類集合2023/05/29
ELISA試劑盒產品,國內分裝配置,大大減少了客戶因為價格高而必須購買國產試劑盒的需求,經優化的試劑盒組分可有效的阻止ELISA試劑盒假陽性和假陰性試驗結果。跟著科技的開展,ELISA試劑盒被越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中,那么ELISA試劑盒的可以分為下面幾類:1、細胞因子檢測試劑盒:如白介素、選擇素、集落刺激因子,腫瘤壞死因子,干擾素,轉化生長因子,趨化因子,細胞因子受體,粘附分子,生長因子,凋亡因子等等心肌梗塞檢測ELISA試劑盒如肌鈣蛋白,肌紅蛋白,C-反應蛋白等等2、內分泌檢測
凍存原代細胞的培養操作步驟2023/05/23
原代細胞(primaryculturecell)是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究,如蛋白質組學、基因組學、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學研究等。凍存原代細胞的培養操作步驟:1.將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體*融化。3.將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無菌環境。4.用70%的酒精沖洗凍存管,
檢測細胞衰老具體流程2023/05/15
細胞衰老是細胞在正常環境條件下發生的功能減退、逐漸趨向死亡的現象。衰老的細胞表現為細胞體積變大,呈扁平狀;細胞核變大,核膜內陷,染色質聚集、固縮、裂解;胞質內顆粒增加,有空泡形成;線粒體的數目及形狀發生改變;膜流動性降低;溶酶體內容物增多,導致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細胞所具有的上述特征成為各種細胞衰老檢測手段的依據。檢測細胞衰老具體流程:1、細胞接種前在6孔培養板中預先放置滅菌的細胞片,每孔加入1×10E5個細胞,37℃5%CO2條件下培養過夜,使細胞在細胞片上生長。2、在超凈工作
雙埃柯病毒PCR檢測試劑盒PCR反應條件2023/05/04
1、變性溫度與時間模板變性溫度是決定PCR反應中雙鏈DNA解鏈的溫度,達不到變性溫度就不會產生單鏈DNA模板,PCR也就不會啟動。變性溫度低則變性不wan全,DNA雙鏈會很快復性,因而減少產量。變性溫度太高,又會影響酶的活性,一般情況下可設為94℃20-30秒,高溫時間應盡量縮短,以保持耐熱DNA聚合酶的活力,最高變性溫度不宜超過95℃。2、退火溫度與時間退火溫度決定PCR特異性與產量。溫度高特異性強,但過高則引物不能與模板牢固結合,DNA擴增效率下降;溫度低產量高,但過低可造成引物與模板錯配,
血清在細胞培養過程中功能2023/04/23
血清的成分十分復雜,既有協助物質運輸的蛋白、營養物質,還有促進細胞生長的激素和因子等,正因為血清這種天然成分的復雜性,使得血清在細胞培養過程中發揮了多種功能:1.提供維持細胞生長的激素,促進所培養細胞的生長;2.彌補基礎培養基中沒有或含量很少的營養物質;3.提供結合蛋白,促進細胞識別和利用維生素、脂類和其他激素等;4.某些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用;5.促進細胞貼壁,提供可促進細胞鋪展在塑料培養基質的因子;6.起酸堿度緩沖液作用;7.提供蛋白酶抑制劑,使細胞消化時殘留
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