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微生物培養基配置過程2025/01/20

培養基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養基礎。一般基礎培養基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養物質。微生物培養基應用范圍很廣。例如，無菌試驗培養基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關系到人民用藥安全；在臨床及食品衛生檢驗中常用選擇、鑒別培養基，此類培養基中根據用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養基；病毒培養及疫苗中則需用組織細胞培養液，主要成分為多種氨基

細胞周期測定操作步驟2025/01/13

細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。BrdU（5-溴脫氧尿mi啶核苷）加入培養基后，可做為細胞DNA復制的原料，經過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經歷了三個

PCR反應溫度條件設置2025/01/06

在PCR自動熱循環中，最關鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個循環，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應從反應混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環儀內由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s，這一遲滯時間的長短取決于幾個因素，包括反應管類型、壁厚、反應混合液體積、熱源(水浴或加熱塊)以及兩步驟間的溫度差，在設置熱循環時應充分給以重視和考慮，對每一儀器均應進行實測。PCR的過程：

流式細胞術抗體特異性常見的驗證方法2024/12/24

常見的流式細胞術抗體特異性驗證方法：1、免疫熒光染色共定位：使用該抗體與已知針對同一細胞結構或分子但標記不同熒光素的另一種抗體同時進行染色。通過觀察兩種熒光信號的共定位情況，如果高度重合，說明該抗體具有較好的特異性。2、競爭抑制實驗：在抗體染色前，先加入過量的未標記的相同抗原，然后再加入標記的抗體進行染色。如果特異性高，過量的未標記抗原會競爭結合位點，導致標記抗體的結合減少，熒光信號降低。3、敲除或沉默基因驗證：對于檢測特定基因表達產物的抗體，如果有條件，可以在細胞中敲除或沉默相應的基因，然后用

細胞實驗主要內容有什么？2024/12/17

細胞實驗是生物學研究中非常重要的實驗方法之一。通過對細胞的操作、觀察和分析，可以揭示細胞的結構和功能，進而深入了解生命的本質。在細胞實驗中，常用的實驗內容包括細胞培養、細胞染色、細胞分離和細胞融合等。細胞培養是細胞實驗的基礎，也是最常見的實驗方法之一。它通過將細胞放入培養基中，并提供適當的營養條件，使細胞能夠在體外繼續生長和分裂。細胞培養可以用來研究細胞的生長、增殖、分化以及對外界環境的響應等。常見的細胞培養技術包括懸浮培養和貼壁培養。細胞染色是用染色劑將細胞中的某些成分染色，從而幫助研究者觀察

酶標記抗體(結合物)的制備方法2024/12/09

結合物即酶標記的抗體（或抗原），是ELISA中最關鍵的試劑。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性，也保持了抗體（或抗原）的免疫活性。酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即戊2醛交聯法和過碘酸鹽氧化法。1、戊2醛交聯法：戊2醛是一種雙功能團試劑，它可以使酶與蛋白質的氨基通過它而聯結。堿性磷酸一般用此法進行標記。交聯方法一步法、兩步法兩種。在一步法中戊2醛直接加入酶與抗體的混合物中，反應后即得酶標記抗體。ELISA中常用的酶一般都用此法交聯。它具有操作簡便、有效（結合率達60%-70%）和重復性好等優點

PCR擴增儀的種類分述2024/11/26

PCR擴增儀的種類總體來說，可以分成兩大類，即普通PCR擴增儀和實時熒光定量PCR擴增儀。一、普通PCR擴增儀1）.普通PCR擴增儀即通常所謂的定性PCR擴增儀。2）.梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。3）.原位PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶原位擴增功能的基因擴增儀。二、實時熒光定量PCR擴增儀1）.金屬板式實時定量PCR儀，還可作為普通PCR儀使用，有的甚至帶梯度功能，可容納的樣本量大，無需特殊耗材，但溫度均一性欠佳，有邊緣效應，標準曲線的反應條件難以做到與

ELISA檢測試劑盒競爭法計算方法2024/11/18

在ELISA檢測試劑盒競爭法中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應最為敏感。競爭法ELISA不易用自視判斷結果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。1.陽性判定值法與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值，現舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒

微生物菌種如何活化？2024/11/04

菌種活化就是將保藏狀態的菌種放入適宜的培養基中培養，逐級擴大培養是為了得到純而壯的培養物，即獲得活力旺盛的、接種數量足夠的培養物。菌種發酵有一般需要2-3代的復壯過程，因為保存時的條件往往和培養時的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應培養環境。要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國際國內常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃冰箱凍結法、液氮超低溫凍結法。對于不同的保存方式活化的方式也不同：1、定期移植法的菌種復蘇較簡單，直接轉接即可

聚合酶鏈式反應(PCR）技術特點歸納2024/10/28

PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學技術，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統，能迅速掌握患者體內的病毒含量，其精確度高達納米級別。聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction，PCR）是一項利用DNA雙鏈復制原理，在生物體外復制特定DNA片段的的核酸合成技術。技術特點：1、靈敏度高PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克（pg=10-1

植物生長素(IAA)試劑盒實驗安全性2024/10/21

植物生長素(IAA)試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。植物生長素(IAA)試劑盒實驗安全性：1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批

ELISA試劑盒洗液的使用基本原則2024/10/14

ELISA試劑盒洗液的使用基本原則：A、同一批號的洗液用完了，建議采用同一項目的試劑洗液。B、某一項目的洗液建議使用該試劑盒內的洗液。C、同一項目的洗液用完了，建議使用該項目其他廠家的洗液。D、同一試劑盒洗液用完了，建議采用同一批號的洗液。E、同一項目所有廠家都用完了，建議采用同一系列項目的洗液F、不建議國產洗液與進口洗液混用，也更不建議不同系列項目的洗液混用，這兩點都是因為洗液的配置成分不同，特別是不同項目的洗液（正規試劑廠家），主要組分都不太一樣。

細胞周期同位素標記法測定原理2024/10/09

標記有絲分裂百分率法(PLM)是一種常用的測定細胞周期時間的方法。其原理是對測定細胞進行脈沖標記、定時取材、利用放射自顯影技術顯示標記細胞，通過統計標記有絲分裂細胞百分數的辦法來測定細胞周期。測定原理：①待測細胞經3H-胸腺嘧啶核苷標記后，所有S期細胞均被標記。②S期細胞經G2期才進入M期，所以一段時間內PLM=0。③開始出現標記M期細胞時，表示處于S期最后階段的細胞，已渡過G2期，所以從PLM=0到出現PLM的時間間隔為G2期的持續時間。④S期細胞逐漸進入M期，PLM上升，到達到最高點的時候說

小鼠ELISA定量試劑盒檢測過程操作規范2024/09/29

小鼠ELISA定量試劑盒檢測過程操作規范如下：1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平進行確定。但最好有專業人員進行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時。3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。4、實驗時，要使底物避光保存。5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。7、將液體

ELISA實驗CV值高分析2024/09/24

免疫檢測法的精確性表現為單次實驗孔間（批內）的重復性和多次實驗之間（批間）的重復性。CV值高則表明精確度低，通常由以下兩個原因造成：移液技術和洗滌技術。一、移液技術1.移液時，槍頭應對準孔，避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性，請預先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等待片刻使體積平衡后再取出。4.移液不充分或移液體積不均，說明移液器需要校正。必要時請檢查移液器并重新校正。5.加樣時，不同的試劑標準品和樣本間都要確保更換槍頭，避免交叉污染。6.確保使用合適的

細胞凍存操作過程注意事項2024/09/18

細胞凍存操作過程注意事項：1.為保持細胞最大存活率，一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘，當溫度下降達－25℃時，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘，到－100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促冰晶形成。3.初次凍存者在下降凍存時，宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置，然后需用溫度計與凍存物并行的辦法，以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系，當已掌握以上各參數

小鼠腦神經瘤細胞培養注意事項2024/09/09

小鼠腦神經瘤細胞培養注意事項：1、收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。2、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。3、用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置2-4

細胞因子的各種類介紹2024/09/02

細胞因子是由免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導多種細胞合成并分泌的具有廣泛生物學活性的低分子質量蛋白或多肽，參與細胞間信號傳導和相互作用。細胞因子的種類：1、白細胞介素（IL）IL是一類能夠雙向調節免疫系統的細胞因子家族，主要參與免疫細胞的分化和激活。最初，IL泛指由白細胞產生的細胞因子，在細胞間發揮作用。研究發現，IL是由多種細胞類型產生并作用于多種細胞的一類細胞因子。IL可劃分為IL-1細胞因子家族、共同γ鏈細胞因子家族、IL-10細胞因子家族、IL-12細胞因子家族等。目前至少發現了40種IL

熒光定量PCR儀選擇關注點匯總2024/08/26

選擇一款適合自己需求的熒光定量PCR儀時關注點:1、儀器的檢測通量在購買定量PCR儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測，實在不必購買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經費有限無法購買384孔板儀器的實驗室，可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會發現樣品的制備和小體系、

PCR反應假陰性，不出現擴增條帶分析2024/08/19

PCR反應常出現假陰性，不出現擴增條帶現象，PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量，④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹di。在酶和引物質量好時，不出現擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩定的消化處理液，其程序亦應固定不宜隨意更改。酶失活：