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免疫組化常見問題解答2023/04/20
免疫組化常見問題解答:1、染色過強a、抗體濃度過高或孵育時間過長降低抗體滴度、抗體孵育時間:室溫1小時或4度過夜b、孵育溫度過高超過37度一般在室溫20-28度c、DAB顯色時間過長或濃度過高顯色時間不超過5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準2、非特異性背景染色a、操作過程中沖洗不充分每步沖洗3次每次5分鐘b、組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長c、組織中含內原性生物su正常非免疫動物血清再封閉d、血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間3、染色弱a、抗體濃度過低、孵育時間
ELISA手工洗板兩種操作方法流程2023/04/11
手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種方法:一、浸泡式1.吸干或甩干孔內反應液;2.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);3.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1~2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;4.吸干孔內液體。吸干應徹di,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;5.重復操作步驟3和4,洗滌3~4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合
水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒特點優勢2023/03/20
水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒特點優勢:1.特異性:所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。2.重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。3.靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。4.實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危
血清應用注意事項2023/03/06
血清應用注意事項如下:1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃–70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清。3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小
探針法熒光定量PCR試劑盒技術特點2023/02/27
探針法熒光定量PCR試劑盒技術特點:1、靈敏度高PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的起始待測模板擴增到微克(μg=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌。2、特異性強PCR反應的特異性決定因素:引物與模板DNA特異正確的結合;堿基配對原則;Taq聚合酶合成反應的忠實性;靶基因的特異性與保守性。3、簡便、快速只需要一次性將反應液加好后,就可以進行擴增。一般2~4
PCR反應NTC 擴增試劑被污染防止步驟2023/02/20
當引物二聚體形成時,如果使用與DNA雙鏈結合的染料,在NTC反應中也可觀察到熒光信號。無論是基于探針還是雙鏈DNA結合染料的反應,在存在污染物的情況下,也可看到晚期擴增。A是擴增曲線B是溶解曲線。如果在每一個NTC反應里都出現擴增,很可能是其中一種或兩種試劑被污染了。可采用以下步驟防止或去除污染。1、使用干凈的工作臺,用帶核酸降解試劑的的溶液擦抹工作臺面。2、用帶dUTP和UDG的反應預混液降解來自前序PCR反應的產物,防止前序PCR反應的污染。3、用新的反應管通過置換不同來源的試劑,發現出現問
ELISA各項實驗選擇分享2023/02/14
在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:1、固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影
PCR操作中污染的預防劃分操作區2023/02/10
進行PCR操作時,操作人員應該嚴格遵守一些操作規程,最da程度地降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。劃分操作區:目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現wan全閉管操作,但無論是否能夠達到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區域內進行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區內進行:(1)標本處理區,包括擴增摸板的制備。(2)擴增區,包括反應液的配制和PCR擴增。(3)產物分析區,凝膠電泳分析,產物拍照及重組克隆的制備。(4)各工作區要有一定的隔離,操作器材專用,要有一定的方向性。如:標本制
?變性瓊脂糖凝膠電泳測定過程2023/01/29
實時熒光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。變性瓊脂糖凝膠電泳測定過程:1、制膠1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10ml的10xMOPS電泳緩沖液和18ml的37%jia醛溶液(12.3M)。10xMOPS電泳緩沖液濃度成分0.4MMOPS,pH7.00.1M乙酸鈉0.01MEDTA灌制凝膠板,預留加樣孔
大鼠ELISA試劑盒試驗操作技巧2023/01/16
大鼠ELISA試劑盒試驗操作技巧:1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。2、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。3、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。5、脫鎂葉綠素a氧化酶酶免ELISA試劑盒保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能
ELISA試劑盒質量掌控2023/01/09
ELISA試劑盒室內質量控制誤差:1、條件下的測定誤差。2、已知值的血清在常規檢驗條件下的誤差。3、未知值的血清在常規檢驗條件下的誤差。4、臨床應用的要求。ELISA試劑盒室內質量控制程序:1、確定控制的對象。2、規定控制對象的標準(預期值)。3、制定或選擇控制方法和手段。4、測量實際數據。5、比較或較對實際數據與預期值之間的差異,并說明產生這一差異的原因。6、超出預定誤差范圍,報警系發出信號,反饋通道中斷。7、采取行動,解決差異,恢復原狀(原標準狀態)的手段發揮作用。
多克隆抗體制備2023/01/05
多克隆抗體定義:多克隆抗體是指與目標蛋白上多種不同表位結合的多種不同抗體.多克隆抗體制備:多克隆抗體的第一步和單克隆抗體一樣,都是將免疫原注射到宿主體內產生免疫反應,激活了多種B細胞。不同的是免疫過后,多克隆抗體就直接從免疫宿主的血清中分離出來,或接著進行純化,沒有與骨髓瘤細胞融合的過程。一旦宿主動物死亡,需要免疫新的動物,這時血清中的抗體就會有所不同。雖然多抗每批次有輕微差別,但是因為它識別的表位多,這個差別影響并不算太大,而單克隆抗體雖然價格偏高,可是特異性更強更穩定。可以說單抗和多抗是各有
基質金屬蛋白酶-15抗體的主要功能作用2022/12/19
抗體是一種被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質,是一種免疫球蛋白。它的產生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細胞相互作用,使淋巴細胞中的B細胞增殖分化而形成漿細胞(效應B細胞),漿細胞可產生分泌抗體。抗體的主要功能作用:1、抗體能抑制病原體的生長繁殖,比如抗病菌的抗體就使入侵的病菌發生凝集,不讓病菌吸取營養,饑餓的病菌就不能繁殖了。2、抗體能阻止病毒或病菌靠近人體細胞,入侵者不能靠近人體細胞,就不能黏附在細胞上,它就不能破壞人體細胞,不能形成感染。3、抗體可以中和病毒,比
細胞培養需要把控的步驟2022/12/12
1、準備工作準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試等。2、取材在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養稱為原代培養。理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養,實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養,分化程度低的組織比分化高的容
兔芳香酶(ARO)elisa定量檢測試劑盒雙抗體夾心法操作步驟2022/11/23
兔芳香酶(ARO)elisa定量檢測試劑盒雙抗體夾心法操作步驟:1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1
生化試劑的技術種類2022/11/14
生化試劑的技術分類:1.生化分離與分析技術光譜技術已從單一的比色法發展為采用分光光度法、透射比濁法、原子吸收和火焰發射光譜法、分子熒光光譜法。分離技術除了一般的離心和超離心技術外,還有層析技術和電泳技術。層析技術包括薄層層析、凝膠層析、離心交換層析、親和層析、氣相層析、高效液相色譜(HPLC)等等。電泳技術中紙電泳、醋酸纖維膜電泳的應用已明顯減少,瓊脂糖電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAG)應用增多,目前已有自動電泳儀。2.自動分析與酶法分析近年來我國引進了自動生化分析儀用以監測酶活性,分析的酶范圍
標準大鼠血清保存注意事項2022/10/31
標準大鼠血清保存注意事項:1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂.2、熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已wan全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用,平
小鼠檢測試劑盒樣本處理要求方法2022/10/24
一、樣本處理方法:1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液5、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或
大鼠ELISA試劑盒標本的處理2022/10/17
大鼠ELISA試劑盒標本的處理:1、血清:室溫血液私人凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,如有沉淀形成,應再次離心3、尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4、細胞培養上清:檢測
選擇購買標準物質考慮要素2022/10/10
在選擇、購買標準物質時,應考慮以下要素:1、特性量的種類及定值方法:某些標準物質可能只適用某一特定方法或專屬領域的應用,某些標準物質的值有特殊規定,如含結晶水的值,應對證書中該類說明加以注意,防止誤選誤用;2、特性量水平:標準物質的特性量水平應與日常測量樣品的水平匹配;3、可接受的不確定度水平:標準物質特性量的相關不確定度水平應與日常測量中的精密度和正確度限度要求匹配;4、基體及可能的干擾:標準物質用于開展方法確認、質量控制以及一些基體效應較為嚴重的測量方法的校準時,基體應與日常測量樣品基體盡可
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