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ELISA試劑盒是否檢測目的抗原鑒定方法2025/06/16

利用干擾實驗即可辨別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原，方法如下：1、將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測抗體。3、后續操作按照試劑盒說明書進行，加檢測抗體、酶復合物和底物。4、實驗完畢后，檢測其標準曲線，如果標準曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原，該試劑盒為偽劣假造elisa試劑盒。5、如果標準曲線無線性，則說明試劑盒檢測抗體已被

細胞轉染三類途徑介紹2025/06/09

轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。轉染的途徑大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類：1.物理介導：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例。2.化學介導：方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術。3.生物介導：方法有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具

逆轉錄實驗三大要素講解2025/06/04

逆轉錄是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成，逆轉錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉錄酶和RNA模板：1.引物：逆轉錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴增有polyA尾的mRNA，對模板質量要求高，較適合克隆實驗。而RandomPrimers具有6-9個堿基，可隨機識別模板并結合，適合復雜結構和

PCR反應擴增DNA的原理2025/05/27

先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈，然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物，即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段，一般需20-30個堿基對，過少則難保持與DNA單鏈的結合。引物與互補DNA結合后，以靶DNA單鏈為模板，經反鏈雜交復性(退火)，在TaqDNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷(dNTP)為原料按5'到3'方向將引物延伸、自動合成新的DNA鏈、使DNA重新復制成雙鏈。然后

細胞生長過程期間介紹2025/05/14

細胞生長過程：游離期；貼壁期；潛伏期；對數生長期；停止期（平臺期）1.游離期：細胞接種后在培養基中呈懸浮狀態，也稱懸浮期。此時細胞質回縮，胞體呈圓球形（10min-5h）。2.貼壁期：細胞附著于底物上，游離期結束。大部分細胞株在10min－5h內貼壁。底物：膠原、玻璃、塑料、其它細胞等血清中有促使細胞貼壁的球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（生長基質），這些帶正電荷糖蛋白的促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細胞再附著在吸附有促貼壁因子的底物上。高級培養瓶多涂有生長基質以幫助細胞貼附。3.潛伏期：此時細胞有

聚合酶鏈反應(PCR)技術循環參數分析2025/05/06

聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片段。PCR反應由一系列的變性→退火→延伸反復循環構成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進行延伸。理論上，經過N次循環可使特定片段擴增到2n-1，考慮到擴增

蛋白質免疫印跡(wb)的實驗步驟2025/04/27

Westernblot（也稱為蛋白質免疫印跡）是一種常用于研究中分離和鑒定蛋白質的技術。它利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)來分離指定樣品中包含的各種蛋白質，然后將分離的蛋白質轉移到硝酸纖維素或PVDF膜上，接下來將膜與對感目標蛋白質的特異抗體一起孵育。在洗膜過程中，未結合的抗體被洗掉，只留下與目標蛋白質結合的抗體，最后通過顯影膠片或熒光掃描來檢測結合的抗體。westernblot的實驗步驟：1.把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維膜上。1）轉移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素

ELISA標準品正確溶解與稀釋2025/04/21

正確溶解與稀釋ELISA標準品ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。怎樣正確溶解、稀釋標準品呢？1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標準品梯度稀釋:（1）標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀

細胞適應無血清培養基的方法2025/04/14

細胞適應無血清培養基的方法：1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基（SFM）中。一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應，接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞全適應了無血清培養基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物

標準物質的制備一般步驟2025/04/07

標準物質的制備是一個關鍵的過程，確保其質量和可追溯性。下面是標準物質的制備一般步驟：1、確定目標物質和純度要求：確定所需的目標物質以及其純度要求。這可能涉及從商業供應商購買純品，從自然來源提取物質，或者通過化學合成等方式制備目標物質。2、基于定量分析方法：建立適當的定量分析方法，以確保目標物質的含量可以準確地測量。這通常涉及使用已知濃度的標準物質進行校準和驗證。3、制備溶液或混合物：根據定量分析方法，準備目標物質的溶液或混合物。這可能包括將目標物質溶解于適當的溶劑中，并按照特定的配比混合。4、純

PCR反應的三個基本步驟介紹2025/03/31

PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：1、模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；2、模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；3、引物的延伸：DNA模板-引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如Taq

實時熒光定量PCR（qPCR）技術簡介2025/03/24

熒光定量PCR也叫Real-TimePCR，是美國PE（PerkinElmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。熒光定量PCR的發展史是一部ABI、羅氏和伯樂等的蕩氣回腸的斗爭史，感興趣的可以去查查。該技術是目前成熟，使用廣泛的半定量PCR技術。熒光染料法（SYBRGreenI）：SYBRGreenI是熒光定量PCR常用的DNA結合染料，與雙鏈DNA非特異性結合。在游離狀態下，SYBRGreen發出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結合，其熒光增加1000倍。所以，一個反應發出的全部熒

抗體依據重鏈抗原性分類及其主要功能2025/03/17

抗體依據重鏈抗原性的不同分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各類抗體主要功能有：IgG：血清中含量最高，因此是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG還能激活補體，結合并增強巨噬細胞的吞噬功能（調理作用和ADCC效應），穿過胎盤，保護胎兒及新生嬰兒免受感染。IgA：分單體和雙體兩種。前者存在血清中，后者存在于黏膜表面及分泌液中，是黏膜局部抗感染的重要因素。IgM：是分子量最大，體內受感染后最早產生的抗體，具有很強的激活補體和調理作用，因此是重要的抗感染因子，且常用于診

細胞凋亡實驗原理是什么？2025/03/11

細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學意義及復雜的分子生物學機制。細胞凋亡實驗原理：1、細胞死亡根據其性質、起源及生物學意義區分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發生事件的組合，是細胞遵循一定規律自己結束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可

實驗室試劑貯存應注意什么？2025/03/03

實驗室試劑貯存應注意點：一、避光其實在實驗室中很多化學試劑見強光都極易揮發變質，所以為避免試劑受到光的輻射，應采用棕色玻璃瓶，外用黑紙包裹，并貯藏于暗室或遮光的試劑柜中。避光保存適用于能進行光化學反應的試劑，如胺類、酚類、醛類等。二、低溫為了使試劑保持足夠低的溫度。采用水箱保存。低溫貯藏適用于容易失去的生化試劑和容易分解的物質。如標準血清應貯藏于±4℃的水箱中，而羧肽酶B和羧肽酶Y則應貯藏于-20℃的低溫水箱。普通試劑應貯藏于溫度較差的陰涼處所。另外勁馬公司主營的ELISA試劑盒的保存應在2-8

ELISA試劑盒包被用抗原解析2025/02/24

ELISA試劑盒包被用抗原解析：用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養物等，須經提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細菌和病毒抗原可以從其培養物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提?。?。重組抗原是抗原基因在質粒體中表達的蛋白質抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質粒體。重組抗原的優點是除工程菌成份外，其他雜質少，而且無傳染性，但純化技術難度較大。以大腸桿菌為

微生物培養基配置一般過程2025/02/17

培養基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養基礎。一般基礎培養基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養物質。微生物培養基應用范圍很廣。例如，無菌試驗培養基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關系到人民用藥安全；在臨床及食品衛生檢驗中常用選擇、鑒別培養基，此類培養基中根據用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養基；病毒培養及疫苗中則需用組織細胞培養液，主要成分為多種氨基

胎牛血清在細胞培養中的作用2025/02/10

新生牛血清（NewbornCalfSerum，簡稱NBCS）：采自出生一天一周內的新生牛；胎牛血清在細胞培養中的作用：1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余yi蛋白酶失活，保護

PCR反應條件優化2025/02/05

1.變性：在第一輪循環前,在94℃下變性5-10min非常重要,它可使模板DNA全解鏈,然后加入TaqDNA聚合酶(hotstart),這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不全,往往使PCR失敗,因為未變性全的DNA雙鏈會很快復性,減少DNA產量.一般變性溫度與時間為94℃1min。在變性溫度下,雙鏈DNA解鏈只需幾秒鐘即可全,所耗時間主要是為使反應體系全達到適當的溫度。對于富含GC的序列,可適當提高變性溫度.但變性溫度過高或時間過長都會導致酶

微生物培養基配置過程2025/01/20

培養基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養基礎。一般基礎培養基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養物質。微生物培養基應用范圍很廣。例如，無菌試驗培養基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關系到人民用藥安全；在臨床及食品衛生檢驗中常用選擇、鑒別培養基，此類培養基中根據用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養基；病毒培養及疫苗中則需用組織細胞培養液，主要成分為多種氨基