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聚合酶鏈式反應（PCR）操作步驟2024/08/05

聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為常用的分子生物學技術之一。操作步驟：1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。10×PCRbuffer5μldNTPmix（2mM）4μl引物1（10pM）2μl引物2（10pM）2μlTaq酶（2U/μl）1μlDNA模板（50ng-1μg/μl）1μl加ddH2O至50μl視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置P

omentin大鼠網膜素ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作步驟2024/07/30

omentin大鼠網膜素ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作步驟：①：抗體包被在96孔板上包被抗體。由于酶標板是由聚苯乙烯制成，其含有的苯環與抗體的氨基酸殘基具有類似π-π堆積作用的引力，結合靜電和疏水作用，可以將抗體吸附于其表面。然后，將未吸附的抗體用緩沖液清洗后，加入含有明膠或牛血清蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）的封閉液以封閉酶標板上未結合抗體的部分。加入封閉液的目的，是防止其他蛋白因靜電或疏水作用吸附在96孔板上，造成假陽性信號，干擾后續實驗的進行。②：免疫識別在96孔板

PCR“平臺效應”相關因素介紹2024/07/22

“平臺效應”是指PCR后期循環產物累積趨于飽和，使原來以指數增長的速率變成平坦的曲線，同時出現非特異產物的大量增加的現象。下列因素可能與平臺效應有關：（1）dNTP或引物的消耗量。（2）反應物的穩定度（dNTP或酶）（3）最終產物的阻化作用（焦磷酸鹽、雙鏈DNA）。（4）非特異產物或引物二聚體與反應物的競爭。（5）產物在高濃度時變性不全，影響引物的延伸。（6）酶與PCR產物的結合，使酶分子減少。合理的PCR循環參數，能最大限度地避免這些因素對產物擴增的影響。

細胞收到處理流程2024/07/08

細胞收到處理流程：1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續服務依據）。2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細

培養基（Medium）常見的滅菌方法2024/07/01

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及生長素和水等。在發酵過程中，培養基滅菌主要有以下幾個原因：如不滅菌，會使生物反應的基質或產物，因雜菌的消耗而損失，造成生產能力的下降;雜菌也會產生代謝產物，這就使產物的提取更加困難，造成得率降低，產品質量下降;雜菌大量繁殖后，會改變反應液的pH值，使反應異常;有些雜菌會分解產物，使生產失敗;如果發生噬菌體污染，生產菌細胞將被裂解，使生產失敗。常見的滅菌方法：1、

標準物質用途有哪些2024/06/24

標準物質的幾個方面用途：1、用作校準標準一是用標準物質檢定儀器的計量性能是否合格，如響應曲線、精密度、靈敏度、檢測限與穩定性等，可選用與儀器測量范圍相宜、量值成梯度的系列標準物質，從量值最小的標準物質開始，逐個測定。二是用標準物質做校準曲線，為實際樣品建立定量關系，此時應選擇與被測樣品基體相匹配的系列標準物質，用與測定樣品相同的方法和測量條件，逐個測定。以上兩種情況的實驗設計和數據處理均基于最小二乘法線性回歸原理。2、用作工作標準用標準物質做測量工作標準，給物質或材料賦值。應選用一種基體與量值均

各種類血清不同點區別2024/06/18

血清（serum）是指在凝固后，將紅細胞、白細胞和血小板等細胞成分除去后所剩下的液體部分。它由水、蛋白質、糖類、激素、酶、電解質和其他生物分子組成。血清可以通過離心或其他方法從全血中分離出來，并可用于研究許多方面的生物學過程。1.血清分類：血清有以下常見四種類別，它們的胎齡：胎牛血清（FBS)胎兒(母牛懷孕3-8個月)新生牛血清(NCS)出生10日內小牛血清（BCS）16-22周供體血清成年牛2.采血方式不同胎牛血清：母牛懷孕3-8個月時，采用剖腹心臟密閉穿刺取血新生牛血清、小牛血清、供體牛血清

血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒樣本處理及要求2024/06/12

血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、

凍存細胞收集處理過程2024/06/03

凍存細胞是通過冷凍保護機制將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝，保持細胞活性，以便長期儲存的一種技術。細胞復蘇后，蛋白質仍有活性，細胞的結構和功能仍完好。下面收到凍存細胞收集處理過程：1、收到快遞后，若發現凍存管破損、箱內已無干冰，請拍照后及時聯系供貨商。2、收到細胞后請盡快復蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認細胞狀態，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時需提供。3、復蘇細胞時不可直接將凍存管丟進水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴

PCR產物純化效率提升要點匯總2024/05/27

PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在條帶單一無其他雜帶的情況下，可以直接對產物進行純化。提升PCR產物純化效率要點匯總如下：1.模板純度，有較多蛋白或其他雜質時，會一定程度影響pcr效率；2.模板量，過高的模板量反而會降低pcr效率特異性；3.引物，引物的長度xu要再效率和特異性間獲得優化，其次要控制引物gc含量；4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；5.mg離子濃度，mg離子濃度過高會降低特異性，濃度過低會降低效率；6.退火溫度：退火溫度低，效率會高，但特異性降低；退火溫度高，效率降低

二抗的選擇指導2024/05/20

二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標簽。由于二抗所具備的優點使得其在免疫學實驗中得以廣泛應用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。二抗，廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時候要綜合考慮一

細胞計數實驗步驟2024/05/13

細胞計數實驗原理：當待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數目。實驗步驟：一.準備工作：取一瓶傳代的細胞，按照《傳代細胞培養（消化法）》中的傳代方法繁殖細胞，待長成單層后以被使用。二.細胞懸液制備：細胞懸液的制備方法是用0.25％的yi蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶yi），吹打制成待測細胞懸液。三.細胞計數：1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數槽上。2.制備計數用的

ELISA試劑盒結果處理報告2024/05/06

ELISA試劑盒結果處理報告：1、結果的判定嚴格依據試劑盒提供的陽性判定值（CO）進行結果判定。提供試劑的同時，說明書上列出的CO值是建立在一系列科學試驗及統計研究的基礎上，不應隨意更改。定量測定需要制備標準曲線，根據標準曲線計算結果。2、灰區的設置通常情況下ELISA結果報告方式為“陰性"或“陽性"，在二者之間有一條明確的分界線，也就是所謂的陽性判定值即CO值，對于樣本的吸光度值（A）高于CO值就判斷為陽性，相反則判斷為陰性，然而在實際工作中經常會出現樣本A值位于CO值附近的人群，即ELISA

選擇適合實驗需要的抗體要點2024/04/28

選擇適合實驗需要的抗體要點：1.一抗選擇要點（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證，請根據說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于

分享ELISA實驗檢測方法的優點和缺點2024/04/22

ELISA實驗有四種常用的檢測方法，分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。現分享下它們的優點和缺點。1.直接法（directELISA）將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標記的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。優勢：操作手續簡短，因無須使用二抗可避免交互反應。缺點：試驗中的一抗都得用酶標記，但不是每種抗體都適合做標記，費用相對提高。2.間接法（indirectELISA）此測定方法與直接法類似，差別在于一級抗體沒有酶標記，改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量

血清的質量標準有什么2024/04/15

血清的種類：現常用血清主要是牛血清、人血清、馬血清等。其中牛血清來源充足、制備技術成熟、經過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品質高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。血清的質量標準:1.內毒素標準為不高于5EU/ml。2.總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數值偏高偏低都會影響實驗的正常進行。3.血紅蛋白標準為不高于20mg/dl。4.pH。國產血清、大多高于7.5，進口

基質金屬蛋白酶-16抗體制備過程2024/04/08

基質金屬蛋白酶-16抗體制備過程：1.免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。2.免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。3.免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜

H9細胞消化液操作說明2024/03/29

操作說明：1.將H9全培養基取出并平衡至室溫，取出包被過Matrix的培養皿/瓶，吸去包被液并加入適量全培養基，置于5%CO2的37℃恒溫細胞培養箱中。2.吸走待傳代細胞培養皿/瓶中的iPS全培養基，并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。3.加入0.5mMEDTA傳代工作液使之全覆蓋皿/瓶底。4.室溫放置5~8min或37℃恒溫細胞培養箱中孵育3~5min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內部大部分細胞間出現間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發白，表明細胞消化時間理

影響鹽析的因素分析2024/03/25

一般來說，所有固體溶質都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過程叫鹽析。影響鹽析的若干因素:1．蛋白質濃度高濃度蛋白溶液可以節約鹽的用量，但許多蛋白質的b和Ks常數十分接近，若蛋白濃度過高，會發生嚴重的共沉淀作用；在低濃度蛋白質溶液中鹽析，所用的鹽量較多，而共沉淀作用比較少，因此需要在兩者之間進行適當選擇。用于分步分離提純時，寧可選擇稀一些的蛋白質溶液，多加一點中性鹽，使共沉淀作用減至低限度。一般認為2.5%-3.0%的蛋白質濃度比較適中。2．離子強度和類型一般說來，離子強度越大，蛋白質的溶解

ELISA試劑盒標本保存注意事項2024/03/18

ELISA試劑盒標本保存注意事項：1、血清標本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，ELISA試劑盒如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長期保存，應在-70℃以下。2、冰凍保存的血清標本須留心避免因停電等構成的重復凍融。ELISA試劑盒標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生損壞效果，然后引起假陰性效果。此外，凍融標本的混勻亦應留心，不要進行劇烈振動，重復倒置混勻即可。3、要留心避免呈現嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有相似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號