參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：Cry3A基因核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產品貨號：FS-P10714
產品分類：熒光探針法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
LMG24842T=CCTCCAB208315T=MCCC1A04137模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Arenibacter│nanhaiticus沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物模式菌株；培養(yǎng)基: 471

大腸埃希菌用于科研模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

金霉素鏈霉菌抗異亮氨變種培養(yǎng)基: CM0012產生Luteomycin藤黃霉素提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥

地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基: 2模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 50℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

 -1465℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

葡萄汁酵母廣柑酒釀造。模式菌株: no廣柑果提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃

偽狂犬病病教學研究模式菌株: no病豬提供形式: 凍結物安全等級: 2培養(yǎng)基: 0生長條件: 37

相思根瘤菌培養(yǎng)基: 63模式菌株: no根瘤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 28-30 定期移植法

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077釀造葡萄酒提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

胞內分枝桿菌鳥-胞內分枝桿菌分離株血清定型模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 61生長條件: 37

AS2.1182飼料。模式菌株: no種屬: Issatchenkia│orientalis提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃

 -1466℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

 ACCC11093、IFFI6017培養(yǎng)基: 56用于制奶種屬: Streptococcuslactis(Lister)Lohnis安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃

豬丹絲菌定性血清模式菌株: no魚提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 396生長條件: 37

短小芽孢桿菌紅麻脫膠，24小時紅麻脫膠程度為5模式菌株: no漚麻水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0081生長條件: 34℃

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077發(fā)酵制黃酒。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

大黃BRCA1  乳腺癌易感基因1抗原 腦腸肽（一種新的生長激素釋放肽）IgG

大黃素PSD-95   突觸后密度蛋白95（抗原） 生長激素釋放激素因IgG

大黃素甲BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)  乳腺癌易感基因2抗原 堿性磷酶標記鼠抗人甲胎蛋白單克隆

大黃酚PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )  蛋白酪氨磷酶-1B（抗原） 胃泌素抑制肽IgG

蘆薈大黃素RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)  維甲受體-α 多肽 糖皮質激素誘導腫瘤壞死因子受體IgG

楊梅素glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]  風疹病糖蛋白多肽片段 DNA結合抑制因子2IgG

二氫楊梅素SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide  突觸相關蛋白-1（多肽抗原） 抗眼鏡蛇蛇蛋白（眼鏡蛇）IgG

標準品SARS S-protein(抗原)  γ-taxilin/LSR5  脂多糖相關反應蛋白5抗體

阿魏SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原)  γ-Catenin  γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體

白藜蘆亞型全病抗原  H5N1-H5β-synuclein/SNCB  核突觸蛋白β抗體
Cry3A基因核酸檢測試劑盒Amoxicillin　阿莫西林/羥氨芐青霉素　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Amoxicillin　阿莫西林（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Fenofibrate　非諾貝特　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Fenofibrate　非諾貝特（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Probenecid　丙磺舒　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Probenecid　丙磺舒（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Norfloxacin　諾氟沙星　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Norfloxacin　諾氟沙星（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

NorfloxacinHCl　諾氟沙星鹽鹽　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

NorfloxacinHCl　諾氟沙星鹽鹽（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Indometacin　吲哚美辛　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Indometacin　吲哚美辛（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Cimetidine　西米替汀　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Cimetidine　西米替汀（標準品）　質量規(guī)格：>95.0%(GC)

Adefovirdipivoxil　阿德福韋/阿德福韋酯　質量規(guī)格：>95.0%(GC)
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。