參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：Cry1A（b）基因核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10722
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
日本慢生根瘤菌分類學研究模式菌株: no棕壤類土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 63生長條件: 28℃

青黃鏈霉菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 0012提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

肺炎克雷伯氏菌培養(yǎng)基: CM0100產(chǎn)2,3-丁二醇。提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

 -1490℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

 ivcas7.00079模式菌株: no安全等級: 1種屬: Bacillus│thuringiensis土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃

阿耶波多氏芽孢桿菌培養(yǎng)基: 821微生物/低溫菌(15℃)土壤/河邊水草根際土提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

小孢矛束霉生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: 2模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 50℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他

米曲霉（公開保藏）培養(yǎng)基: 綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然。發(fā)酵醋，產(chǎn)纖維素酶等；科研。提供形式: 凍干管安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 25-28，好氧

海海芽孢桿菌土壤微生物學研究模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 444生長條件: 37℃

 -1491℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

微小桿菌培養(yǎng)基: 832模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

假絲酵母屬飼料。模式菌株: no復合飼料提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃

蘇云金芽胞桿菌用于抗蟲基因的分離和抗蟲相關基礎研究。模式菌株: no1-5cm土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃

蘇云金芽孢桿菌生物殺蟲劑模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃

 ATCC39022培養(yǎng)基: 16模式菌株: no種屬: Corynebacterium│glutamicum提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

CD34  CD34抗原（表面的唾液粘蛋白）Wnt1  信號通路Wnt1抗體

對香豆CD38(mouse, rat)  CD38多肽（小鼠、大鼠）WNK4  WNK4抗體

延胡索乙素CD38(human)  CD38抗原（人）WNK3 protein  絲氨/蘇氨激酶家族成員的基因WNK3抗體

羊藿苷CD36  CD36（多肽）WNK1  賴氨缺陷型蛋白激酶1抗體

柚皮素CD7  CD7抗原WISP39/FKBPL  p21調控蛋白WISP39抗體

原花青素CD40L(CD40 Ligand/TNFSF5/CD154)  CD40L抗原WISP1  Wnt1信號通路蛋白1抗體

標準品CD44  CD44抗原 (多肽抗原)WIPF2  WASP結合蛋白抗體

柚皮苷Argireline peptide   抗皺寡肽-1/六勝肽-3/阿基瑞林/乙酰六勝肽-3WIP1/PPM1D  原癌基因WIP1抗體

巖白菜素GHRP-2 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 2)  醋促生長激素釋放肽2WIG-1/PAG608 (3E4)  野生型P53誘導基因1單克隆抗體

鹽青藤堿GHRP-6 Acetate peptide(Growth hormone-releasing peptides 6)  醋促生長激素釋放肽6WIG-1/PAG608  野生型P53誘導基因1抗體
Cry1A（b）基因核酸檢測試劑盒Dexamethasone　地塞米松,氟美松（標準品）　質量規(guī)格：>97%

DiltiazemHCL　鹽地爾硫卓　質量規(guī)格：>97%

DiltiazemHCL　鹽地爾硫卓(標準品)　質量規(guī)格：>97%

Dimesna　地美司鈉　質量規(guī)格：>97%

Dolasetronmesylate　甲磺多拉司瓊　質量規(guī)格：>97%

Dolasetronmesylate　甲磺多拉司瓊(標準品)　質量規(guī)格：>97%

DoxepinHCl　鹽多塞平　質量規(guī)格：>97%

DoxepinHCl　鹽多塞平（標準品）　質量規(guī)格：>97%

Duloxetinehcl　鹽度洛西汀　質量規(guī)格：>97%

Duloxetinehcl　鹽度洛西汀(標準品)　質量規(guī)格：>97%

Dutasteride　度他雄胺　質量規(guī)格：>97%

Dutasteride　度他雄胺(標準品)　質量規(guī)格：>97%

Edaravone　依達拉奉　質量規(guī)格：>97%

Edaravone　依達拉奉（標準品）　質量規(guī)格：>97%

Hydroquinidine　氫化奎寧定;雙氫奎尼丁　質量規(guī)格：>97%
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。