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蘇州醫(yī)工所繆鵬課題組開發(fā)出一種新型高靈敏miRNA傳感器

研發(fā)快訊 2024年10月15日 11:58:47來源:中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所 11526
摘要近期,蘇州醫(yī)工所繆鵬課題組通過環(huán)張力促進的疊氮-炔環(huán)加成反應(yīng)(SPAAC)輔助三維DNA納米結(jié)構(gòu)的調(diào)控,并進一步開發(fā)了新型的miRNA檢測方法。

  【儀表網(wǎng) 研發(fā)快訊】微小核糖核酸(miRNA)是一類短鏈非編碼RNA,在基因調(diào)控中發(fā)揮一系列關(guān)鍵作用。2024年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎授予美國科學(xué)家Victor Ambros和Gary Ruvkun,以表彰他們發(fā)現(xiàn)了miRNA及其在轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控中的作用。研究表明,異常的miRNA表達往往是由多種癌癥類型的基因畸變引起的,并通過靶基因表達的失調(diào)在癌癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。因此,許多miRNA與腫瘤的發(fā)病機制密切相關(guān),包括細胞增殖、侵襲等。miRNA診斷模型的建立有助于早期檢測多種高風(fēng)險的癌前病變。
 
  近期,蘇州醫(yī)工所繆鵬課題組通過環(huán)張力促進的疊氮-炔環(huán)加成反應(yīng)(SPAAC)輔助三維DNA納米結(jié)構(gòu)的調(diào)控,并進一步開發(fā)了新型的miRNA檢測方法(圖1)。首先設(shè)計了5條單鏈DNA用于組裝DNA截錐體納米結(jié)構(gòu)。通過序列末端巰基修飾可將其底部牢固地結(jié)合在金電極表面;其頂端序列與目標(biāo)miRNA序列結(jié)合并被雙鏈特異性核酸酶(DSN)降解,進而激活該納米結(jié)構(gòu)的三條側(cè)鏈與P1進行SPAAC反應(yīng)。SPAAC是一種無金屬無酶輔助的疊氮化物和環(huán)辛基類炔烴之間的點擊反應(yīng),具有高選擇性和生物正交特性,因此非常適合在DNA納米結(jié)構(gòu)的離散位點上進行連接反應(yīng)。生成的三條長單鏈自發(fā)折疊為莖環(huán)結(jié)構(gòu),縮短了P1末端修飾的二茂鐵與電極之間的距離,有效提升了電化學(xué)響應(yīng)(圖2)。該傳感器利用三維DNA納米結(jié)構(gòu)進行目標(biāo)序列的高效分子識別,進一步利用酶促反應(yīng)與SPAAC點擊化學(xué)反應(yīng)調(diào)控DNA納米結(jié)構(gòu),實現(xiàn)電化學(xué)信號放大。該傳感器具有極高的靈敏度,此外在生物樣本測試中表現(xiàn)出高度的特異性和穩(wěn)定性(圖3),具有廣闊的應(yīng)用前景。
 
圖1 SPAAC輔助DNA納米結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換及DSN酶促信號放大示意圖
 
圖2 電極修飾的電化學(xué)表征及莖環(huán)結(jié)構(gòu)信號增強效應(yīng)
 
圖3 基于三維DNA納米結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換及點擊化學(xué)的miRNA電化學(xué)傳感器性能結(jié)果
 
  相關(guān)結(jié)果已發(fā)表在Nano Letters上(中國科學(xué)院一區(qū))。論文第一作者為碩士研究生王婷婷,通訊作者為繆鵬研究員。該工作得到了國家自然科學(xué)基金(82272119)的資助。

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