使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262探針法qPCR試劑盒
貨號:CP96975
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
?實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下是轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262探針法qPCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Human POTE-E(POTE-E(POTE Ankyrin Domain Family Member E)) ELISA Kit資源名稱鴨疫里氏桿菌種屬:Riemerella│anatipestifer分離基物:鴨心血

Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit資源名稱乳房鏈球菌種屬:Streptococcus│uberis分離基物:患病奶牛

Human POTE-D(POTE-D(POTE Ankyrin Domain Family Member D)) ELISA Kit資源名稱氏桿菌種屬:Pasteuerlla│gallinarum分離基物:水牛

Human FETUB(Fetuin B) ELISA Kit資源名稱牛溶血鏈球菌種屬:Streptococcus│bovis分離基物:牛

Human fFDFT1(Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit資源名稱山羊葡萄球菌種屬:Staphylococcus│caprae分離基物:羊

Human FG(Fibrinogen) ELISA Kit資源名稱豬葡萄球菌種屬:Staphylococcus│hyicus分離基物:豬心

Human FGF23(Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit資源名稱非洲馬瘟病毒（VI型）種屬:類戊肝病毒屬│提供形式:凍干物

Human FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit資源名稱非洲馬瘟病毒（IX型）種屬:類戊肝病毒屬│提供形式:凍干物

Human FGFR3(Fibroblast Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit資源名稱流產(chǎn)布魯氏菌 生物Ⅵ型種屬:Brucella│abortus BiovarⅥ提供形式:凍干物

Human FGFR4(Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit資源名稱Alternaria angustiovoidea種屬:Alternaria│angustiovoidea分離基物:莖

Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit資源名稱Amycolatopsis keratiniphila subsp. nogabecina種屬:Amycolatopsis│keratiniphila subsp. nogabecina提供形式:凍干物

Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit資源名稱Chlamydomyces palmarum種屬:Chlamydomyces│palmarum分離基物:根

Human FGα(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit資源名稱Mycetocola reblochoni種屬:Mycetocola│reblochoni提供形式:凍干物

Human FGβ(Fibrinogen Beta) ELISA Kit資源名稱Myrmecridium sp.種屬:Myrmecridium│sp.提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human f-Hb(Free Haemoglobin) ELISA Kit資源名稱Pestalotiopsis cocculi種屬:Pestalotiopsis│cocculi分離基物:根

Human FLNα(Filamin A, Alpha) ELISA Kit資源名稱Tritirachium roseum種屬:Tritirachium│roseum分離基物:土壤

Human FLOT2(Flotillin 2) ELISA Kit資源名稱暗灰色馬杜拉放線菌種屬:Actinomadura│atramentaria提供形式:凍干物

Human Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit資源名稱棒狀鏈霉菌種屬:Streptomyces│clavuligerus提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human FOXC1(Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit資源名稱北里孢菌屬種屬:Kiatasatospora│griseola提供形式:斜面培養(yǎng)物

Human ITG αⅤβ3(Integrin αⅤβ3) ELISA Kit資源名稱草色串孢種屬:Torula│herbarum分離基物:植物殘?bào)w
轉(zhuǎn)基因品系大豆GU262探針法qPCR試劑盒CTAG| CTAG1| ESO1| LAGE2| LAGE2A| Cancer/testis antigen 6.1| L antigen family member 2形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  CSAp陰性(CSAp-)。 結(jié)腸抗原3，陰性。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 癌基因c-myc, K-ras, H-ras, myb, sis 和fos的表達(dá)呈陽性。 未檢測到癌基因N-myc和N-ras的表達(dá)。 表達(dá)腫瘤特異的核基質(zhì)蛋白CC-4，CC-5和CC-６。 培養(yǎng)條件  L15: Leibovitz Medium  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

HSP-40(Heat Shock Protein 40)|DNAJB1|Hdj1|HSPF1|DnaJ(Hsp40) homolog|subfamily B|member 1|dnaJ homolog subfamily B member 1|DnaJ protein homolog 1|DNAJ1|hDj-1|Heat shock 40 kDa protein 1|HSP40|Human DnaJ protein 1|radial spoke 16 homolog B|RSPH16B|Sis1形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  C-33 A 細(xì)胞株是N. Auersperg從宮切片中建立的一系列細(xì)胞株(參見ATCC CRL-1594和ATCC CRL-1595)中的一株。 細(xì)胞一開始就表現(xiàn)出亞二倍體核型及上皮細(xì)胞形態(tài)。 連續(xù)傳代可以觀察到核型不穩(wěn)定。 存在成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白(pRB)，但大小不正常。 P53表達(dá)上調(diào)，且有一個(gè)273位密碼子的點(diǎn)突變導(dǎo)致Arg -> Cys的替換。 人瘤病毒DNA及RNA陰性。 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

OGFR| opioid growth factor receptor|Protein 7 60| Zeta type opioid receptor形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細(xì)胞來源于一個(gè)細(xì)胞集落不規(guī)則沒有顯著角質(zhì)化的侵染性鱗狀細(xì)胞癌。 單層培養(yǎng)的細(xì)胞間可以觀察到帶狀連接，也注意到有細(xì)胞質(zhì)張力絲。 1970年發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。 腫瘤壞死因子(TNF)α抑制ME-180的生長。 這株細(xì)胞含有人瘤病毒(HPV)DNA，與HPV-39的同源性高于HPV-18。 培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

CALCB(Calcitonin gene-related peptide 2)|CALC2|Beta-CGRP|CGRP-II|Beta-type CGRP|Calcitonin gene-related peptide II形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  這株細(xì)胞是J. Sykes于1974年建立的（參考ATCC HTB-33）。 有報(bào)告稱MS751細(xì)胞含有人狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。 [22995] [23180] 后來發(fā)現(xiàn)MS751細(xì)胞包含HPV-45基因組的一部分，而其中E6/E7區(qū)域表達(dá)呈poly(A)+RNA的形式。 [49721] 培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

AMY||NOEL1|Noelin|NOELIN1|OlfA|olfactomedin 1|OLFM1形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  人肝膽管癌細(xì)胞。據(jù)說產(chǎn)CEA和CA19-9。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

BHLHB1| bHLHe19| OLIG2| OLIGO2| PRKCBP2| RACK17形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  據(jù)報(bào)道產(chǎn)球蛋白和甲胎蛋白。 培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

INSR|CD220|CD220 antigen|HHF5|insulin receptor|IR形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣生長特性 貼壁生長特征特性  人肝癌細(xì)胞株。這株細(xì)胞從裸鼠體外移植瘤中建立。 培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%

HABP1|C1QBP(Hyaluronan Binding Protein 1)|gC1qBP|gC1qR|SF2p32|p32|Glycoprotein gC1qBP|HABP1p33|GC1q-R protein|C1q globular domain-binding protein|gC1Q-R|Hyaluronan-binding protein 1|Mitochondrial matrix protein p32|splicing factor SF2-associated protein形態(tài)特性  上皮細(xì)胞生長特性 貼壁生長特征特性  SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年從卵巢腫瘤病人的腹水分離得到。 此細(xì)胞對腫瘤壞死因子和幾種細(xì)胞毒性藥物包括白喉毒素、順鉑和阿霉素均耐受。 在裸鼠中致瘤，且形成與卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。 培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%