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大鼠雪旺氏細胞注意事項

來源:上海莼試生物技術有限公司   2025年03月19日 16:20  

大鼠雪旺氏細胞注意事項

一、取材與分離

1. 快速操作

- 組織取材后需立即處理,避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。

- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織,去除血液、雜質。

2. 消化酶選擇

- 根據(jù)組織類型選擇消化酶,避免過度消化導致細胞損傷。

- 消化時間需嚴格控制(通常 10-30 分鐘),可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。

二、培養(yǎng)條件優(yōu)化

1. 培養(yǎng)基選擇

- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基(如 DMEM、RPMI 1640 等),部分細胞需添加胰島素、EGF 等。

- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次,減少細胞適應壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細胞貼壁能力較弱,可能需要包被培養(yǎng)皿(如膠原蛋白、多聚賴氨酸)。

- 傳代時密度建議控制在 70%-80%,過度匯合會導致接觸抑制和分化。

三、污染控制

1. 無菌操作

- 全程在超凈臺操作,使用一次性耗材,避免交叉污染。

- 培養(yǎng)基中可添加雙抗,但長期使用可能影響細胞活性。

2. 支原體檢測

- 定期檢測支原體污染(如 PCR 法),污染后需及時丟棄細胞。

四、狀態(tài)監(jiān)控

1. 日常觀察

- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色,及時更換培養(yǎng)基(通常每 2-3 天換液一次)。

- 異常形態(tài)(如細胞變圓、碎片增多)可能提示污染或營養(yǎng)不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細胞分裂次數(shù)有限(一般 5-10 代),需及時凍存早期代次細胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清(或專用凍存培養(yǎng)基),梯度降溫后液氮保存。


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