使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數規格：
產品名稱：番茄內標準LAT52基因染料法PCR試劑盒
貨號:CP96887
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
以下是番茄內標準LAT52基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Guinea pig IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit資源名稱科氏葡萄球菌解脲亞種種屬:Staphylococcuscohniisubsp.urealyticus分離基物:人類皮膚
Guinea pig IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit資源名稱頭葡萄球菌解脲亞種種屬:Staphylococcuscapitissubsp.urealyticus分離基物:人體皮膚
Guinea pig IL-4(Interleukin 4) ELISA Kit資源名稱木賊鐮孢種屬:Fusariumequiseti分離基物:花菜籽
Guinea pig MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit資源名稱Amycolatopsisdecaplanina種屬:Amycolatopsisdecaplanina分離基物:土壤
Guinea pig MMP-8(Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit資源名稱Amycolatopsiskeratiniphilasubsp.keratiniphila種屬:Amycolatopsiskeratiniphilasubsp.keratiniphila分離基物:土壤
Guinea pig MYO(Myoglobin) ELISA Kit資源名稱棘孢小單胞菌種屬:Micromonosporaechinospora安全等級:1
Guinea pig NGF(Nerve Growth Factor) ELISA Kit資源名稱大孢鏈霉菌種屬:Streptomycesmacrosporus安全等級:1
Guinea pig NOS3/eNOS(Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit資源名稱紫紅鏈霉菌種屬:Streptomycesviolaceoruber分離基物:土壤
Guinea pig OC/BGP(Osteocalcin) ELISA Kit資源名稱法國蜜環菌種屬:Armillariella│gallica提供形式:斜面培養物
Guinea pig PCSK9(Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9) ELISA Kit資源名稱中間普氏菌（不提供）種屬:Prevotellaintermedia分離基物:膿胸
Guinea pig PEDF(Pigment Epithelium Derived Factor) ELISA Kit資源名稱綠葉假單胞菌種屬:Pseudomonas│chlororaphis提供形式:凍干物
Guinea pig PIIINP(N-Terminal Procollagen Ⅲ Propeptide) ELISA Kit資源名稱紫芝(紫靈芝，中華靈芝)種屬:Ganoderma│sinense提供形式:斜面培養物
Guinea pig PIINP(Procollagen II N-Terminal ProPeptide) ELISA Kit資源名稱變色栓菌（云芝）（斜面）種屬:Trametes versicolor提供形式:斜面培養物
Guinea pig RANTES(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed And Secreted) ELISA Kit資源名稱頭狀葡萄球菌頭狀亞種種屬:Staphylococcus│capitis subsp. capitis提供形式:凍干物
Guinea pig TIMP-1(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit資源名稱Z小弧菌種屬:Vibrio mimicus提供形式:凍干物
Guinea pig TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit資源名稱腸沙門氏菌腸亞種傷寒血清型種屬:Salmonella│enterica subsp. enterica serovar Typhi提供形式:凍干物
Guinea pig TNF-α(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit資源名稱鴨沙門氏菌種屬:Salmonella anatum提供形式:凍干物
Guinea pig TGF-β1(Transforming Growth Factor Beta 1) ELISA Kit資源名稱嗜鞣管囊酵母種屬:Pachysolen tannophilus提供形式:凍干物，斜面
Guinea pig VEGF-A(Vascular Endothelial cell Growth Factor A) ELISA Kit資源名稱志賀毒性大腸埃希氏菌種屬:Escherichia coli STEC分離基物:腹瀉病例糞便標本
Guinea pig IL-8(Interleukin 8) ELISA Kit資源名稱總狀橫梗霉種屬:Lichtheimia│ramosa提供形式:斜面培養物
番茄內標準LAT52基因染料法PCR試劑盒HP|HP-1|hp2-alpha|HPA1S|binding peptide|BP|haptoglobin alpha(1S)-beta|haptoglobin alpha(2FS)-beta|haptoglobin|alpha polypeptide|haptoglobin|beta polypeptide|HP2AL|PHA2改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(MLST)產品用途：添加萬古霉素即為MLST,用于阪崎腸桿菌PCR檢驗方法選擇性增菌。(GB、SN、ISO)產品規格;225ml/X10袋冷藏：2-8℃
IFN-γ|IFNG|IFG|IFI|Type II Interferon哥倫比亞血平板產品用途：哥倫比亞血平板用于一般病原菌的分離培養和溶血性細菌的鑒別。產品規格：90mmX20個冷藏：2-8℃
Immunoglobulin E巧克力平板培養基(普通)產品用途：巧克力平板培養基(普通)用于分離奈瑟氏菌、流感嗜血菌等。產品規格：90mmX20個冷藏：2-8℃
IgG(Immunoglobulin G)巧克力平板培養基（單抗）產品用途：添加萬古霉素，用于分離奈瑟氏菌、流感嗜血菌等。產品規格：90mmX20個冷藏：2-8℃
IL-10|IL10|IL10A|CSIF|TGIF沙氏瓊脂平板產品用途：沙氏瓊脂平板用于真菌的分離培養，還用于一次性使用衛生用品真菌菌落總數檢測。(GB)產品規格：90mmX20個冷藏：2-8℃
IL-6(Interleukin 6)|IL6|BSF2|HGF|HSF|IFNB2|CDF營養肉湯產品用途：營養肉湯用于一般細菌培養、轉種、復壯、增菌等，也可用于消毒效果測定。(GB)產品規格：10mlX20支冷藏：2-8℃
IL-8|IL8|CXCL8|GCP-1|GCP1|LECT|LUCT|LYNAP|MDNCF|MONAP|NAF|NAP-1|NAP1|3-10C|AMCF-I|K60營養瓊脂（斜面）用途：營養瓊脂（斜面）用于普通菌種的保存。（GB、ISO)產品規格：20支/盒冷藏：2-8℃
KIM-1|HAVCR1|HAVCR|HAVCR-1|KIM-1|KIM1|TIM|TIM-1|TIM1|TIMD-1|TIMD1雙糖鐵斜面產品用途：雙糖鐵斜面用于鑒別腸道菌發酵葡萄糖和乳糖，及產生硫化氫的生化反應。(GB)產品規格：20支/盒冷藏：2-8℃
