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H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-07 15:16:14瀏覽次數:296次

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貨號 FS-01S63210
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公司提供的生化試劑盒,質量信得過產品,售后完善。服務于高校及免疫學科研單位,竭誠為您提供更周到的服務更優質的產品。

產品名稱:H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法

規格:100管/48樣

檢測方法:微量法

貨號:FS-01S63210


商品介紹:

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153604.png

粗酶液提取:

1、細胞或組織樣品的制備:

培養細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1ml提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

操作步驟:

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

Anti-2,4-D2,4-二氯苯氧乙酸 /除草劑/激素型除草劑抗體 0.1ml

Anti-5-HT5-羥色胺抗體 0.1ml

Anti-5-HTR1A5-羥色胺受體1A抗體 0.1ml

Anti-5-HT1B5-羥色胺受體1B抗體 0.1ml

Anti-5-HTR2A5-羥色胺受體2A抗體 0.1ml

Anti-5-LOX5-脂氧合酶抗體 0.1ml

anti-8-OHdG8-羥基脫氧鳥苷 0.2ml

Anti-AACT-α1α-1抗胰抗體 0.1ml

Anti-AATα-1抗抗體 0.2ml

Anti-AATF拮抗凋亡轉錄因子抗體 0.2ml

Anti-ABCB6ABCB6抗體 0.2ml

Anti-ABCG1三磷酸腺苷結合盒G1抗體 0.2ml

Anti-ABCG2三磷酸腺苷結合盒G2抗體 0.2ml

Anti-ABL1ABL1抗體 0.1ml

Anti-ABL2ABL2抗體 0.2ml

Anti-ACE1血管緊張素轉換酶抗體 0.1ml

Anti-ACEI血管緊張素1轉換酶抑制劑抗體 0.1ml

Anti-Acinus腺泡Acinus抗體 0.1ml

Anti-Ack1Ack1抗體 0.2ml

Anti-β-Actinβ-肌動蛋白抗體 0.1ml

Anti-ACTH促腎上腺皮質激素抗體 0.1ml

Anti-Actin α /α-SMA   肌動蛋白α抗體 0.1ml

Anti-AD7C-NTP/NTP/AF   神經絲蛋白抗體 0.1ml

Anti-ADAM-TS1/METH1  整合素樣金屬蛋白酶與型 0.2ml

Anti-ADAM-TS7   整合素樣金屬蛋白酶與l

Anti-Adducin protein內收蛋白抗體 0.2ml

Anti-ADFP/ADRP/adipophilin  脂肪組織分化相關蛋白抗體 0.2ml

Anti-Adipo R1  脂聯素受體-1抗體 0.1ml

Anti-Adipo R2 脂聯素受體-2抗體 0.1ml

接觸蛋白1(CNTN1)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Contactin 1 (CNTN1)96TMus musculus (Mouse)

多效生長因子(PTN)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Pleiotrophin (PTN)96THomo sapiens (Human)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TMus musculus (Mouse)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TRattus norvegicus (Rat)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TOryctolagus cuniculus (Rabbit)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TBos taurus; Bovine (Cattle)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TEquus caballus; Equine (Horse)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TChicken (Gallus)

雙調蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TSus scrofa; Porcine (Pig)

Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1)96THomo sapiens (Human)

Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1)96TMus musculus (Mouse)

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骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96THomo sapiens (Human)

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骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TRattus norvegicus (Rat)

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轉化生長因子β誘導蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法)CLIA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI)96TBos taurus; Bovine (Cattle)

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