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| 貨號 | FS-X10963 |
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英文名稱：BML-277
產品規格：1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號：FS-X10963
產品介紹:
BML-277是一種選擇性的檢測點激酶2(Chk2)抑制劑，IC50為15nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：516480-79-8 別名：Chk2 Inhibitor II;C 3742 純度：97.14% 分子量：363.8 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
枯草芽孢桿菌人甲狀腺結合球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工MM(GP-MM)
球毛殼菌人晚期糖基化終末產物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
巨獸芽孢桿菌人C多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
點柄粘蓋牛肝菌人晚期糖基化終末產物受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺抗體(TAb)
畢赤酵母人胰高血糖Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺抗體(TAb)
弗雷德里克斯堡假單胞菌人胰多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)
大腸埃希菌人胰島自身抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)
殼蕉孢菌人谷脫羧Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠兒茶(CA)
雜色尾孢人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠兒茶(CA)
類動膠杜搟氏菌屬人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)
休哈塔假絲酵母休哈塔亞種人未磷化類胰島生長因子結合蛋白-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)
大豆慢生根瘤菌人甲狀旁腺激樣蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)
解桿菌人內脂/內臟脂肪Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)
柑橘炭疽盤孢菌人apelin 12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌營養1(CT-1)
大腸埃希菌人葡萄糖依賴性胰島釋放多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌營養1(CT-1)
喜鹽芽孢桿菌人胰島原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)
尾部結構蛋白抗體萬壽菊鏈格孢家兔皮膚細胞
8-羥基鳥DNA糖基化向日葵鏈格孢大額牛肺細胞
µ-型阿片受體抗體絲軸黑粉菌樹鼩腎上皮樣細胞
胚胎干細胞關鍵蛋白2抗體角鱗灰鵝膏菌小菊頭蝠肺成纖維樣細胞
激酶2(Chk2)抑制劑(BML-277)耐寒短桿 毛栲利△1-吡咯啉-5-羧合成
香菇 3,4-二羥基肉桂乙酯谷氨酰合成
黃桿 DL-甲狀腺腫谷脫氫
釀酒酵母 二氫7-羥基-3-(4-羥苯基)-4-苯并吡喃酮琥珀-Q還原
大豆慢生根瘤 色C氧化還原
Botryosphaeria parva 鹽帕洛諾瓊色C還原
釀酒酵母 7-羥基黃酮琥珀-Q還原
棲植物潘隆尼亞堿湖桿 S-(5'-腺基)-L-化蛋色C氧化還原
法布里德巴利酵母 8-姜色C還原
產氨棒桿 紫草NADH脫氫
根瘤 β-桉葉ATP合成
粘著劍* 3,4,5-氧基苯乙烯游離睪酮
球孢白僵 羊毛甾游離雌二
核盤 木蘭花堿（化物）α2巨球蛋白
平臍蠕孢 甲磺雷沙吉蘭造血器官壞死病抗體
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