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貨號	FS-X10402

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：mTOR激活劑(自噬抑制劑)

英文名稱：MHY1485

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10402

產品介紹:

英文名稱：MHY1485

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

MHY1485是一種mTOR激活劑，也是一種自噬(autophagy)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：326914-06-1

純度：99.40%

分子量：387.39

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

華盛頓腥擲孢菌血小板衍化生長因子γ抗體Anti-AK2 Antibody(PB1089)存活抗體/生存蛋白(Surv)

運動發酵單孢菌（現1）血小板47蛋白抗體Anti-AKAP12 Antibody脆性組三聯體(FHIT)

虎掌菌*相關血漿蛋白A2抗體Anti-AK1 Antibody催乳誘導蛋白(PIP)

水鹽單胞菌屬血漿谷羧肽抗體Anti-AKR1C1/C2 Antibody催乳抑制激(PIH)

殼菌磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-AKR1B10 Antibody催乳釋放激(PRH)

弗吉尼亞鏈霉菌撲克蒙蛋白抗體Anti-AKR1B1 Antibody催乳(PRL)

粟酒裂殖酵母癌易感基因相關蛋白2Anti-AKR1D1 Antibody催產受體(OXTR)

多主葡萄殼菌細小清蛋白抗體Anti-AKR1D1 Antibody催產(OT)

灰葡萄孢（灰霉病菌）脂酰肌聚糖A抗體Anti-AKT1 Antibody促有絲分裂因子(MF/MPF)

Havobacterium原鈣粘蛋白11抗體Anti-AKR7A2 Antibody促胰液/胰泌(Secretin)

綠色木霉P選擇糖蛋白配體1抗體Anti-AKT2 Antibody(PB0006)促胰液/分泌受體(SR)

秸稈色假單胞菌蛋白激N2抗體Anti-AKT2 Antibody促胰液(secretin)

黃白側耳G蛋白偶合受體激2抗體Anti-Alas1 Antibody促性腺激釋放激(GnRH)

釀酒酵母早期發育調控蛋白2抗體Anti-ALDH1A1 Antibody促酰化蛋白(ASP)

克魯弗酵母磷酯Cβ3Anti-ALCAM Antibody促胃液受體(GsaR)

污黑腐皮殼血小板源性生長因子A抗體Anti-ALDH18A1 Antibody促睡眠肽(DSIP)

無害李斯特菌Listeria│innocua 質量規格：>99%,BR

乳桿菌屬Lactobacillus│sp. 質量規格：HPLC≥98%，標準品

斯魯菲亞紅酵母Rhodotorula│slooffiae 質量規格：>98%,BR
mTOR激活劑(自噬抑制劑)木耳(雪白林) 苯新戊烷乙二酯Bcl-2相關死亡促進因子

膠凍樣芽胞桿 3-聯苯磷化Bcl-2相關死亡促進因子

解脂亞羅酵母 4-聯苯葡萄糖

具黃曲霉叔丁氧羰基-D-天冬 4-芐酯維生B3

解脂亞羅酵母 2-羥基-5-氟吡啶犬尿

擬康寧木霉 5-氟-2-甲氧基吡啶喹啉磷核糖基轉移

細鏈格孢八甘維生B5

蘇云金芽孢桿莫里遜亞種 3,6-二噠-4-甲BCA蛋白

發酵畢赤酵母 4-芐基-4-羥基唾液

反硝化鹽單胞 Boc-Lys(Z)-pNA鈣調磷

雙孢蘑菇 1-Boc-L-氮雜環丁烷-2-羧Slingshot同源物

金針菇（毛柄、冬菇）) 6-溴喹喔啉鈣調蛋白依賴性蛋白激激

蘋果*（可換成cfcc 7946） (1,5-環辛二烯)二化釕(II)鈣調蛋白依賴性蛋白激1D

矩圓黑盤孢 (1,5-環辛二烯)化釕, 聚合物鈣調依賴蛋白激II

曲霉 2-羥基丁鈉單絲蛋白激1
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)