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貨號	FS-X11044

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）

英文名稱：TG100-115

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X11044

產品介紹:

TG100–115是PI3K γ和δ抑制劑，IC50分別為83和235nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：677297-51-7

純度：98.96%

分子量：346.34

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸埃希氏菌(大腸桿菌)*Bacillus lentus大鼠苗條受體(LR/Ob-R)

NesterenkoniaBacillus coagulans大鼠瘦(LEP)

匍柄霉Bacillus circulans大鼠瘦(LEP)

解淀粉芽孢桿菌Bacillus megaterium大鼠白血病抑制因子(LIF)

矩圓黑盤孢Bacillus cereus大鼠白血病抑制因子(LIF)

莫爾氏假單胞菌Bacillus cereus大鼠L選擇(L-Selectin/CD62L)

阿姆斯特丹曲霉Bacillus pumilus大鼠L選擇(L-Selectin/CD62L)

枯草芽孢桿菌Bacillus circulans大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)

杏鮑菇Bacillus cereus大鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)

大腸埃希氏桿菌Bacillus pumilus大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)

南假單胞菌Bacillus cereus大鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)

糙皮側耳Bacillus cereus大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)

束紅球菌Bacillus thuringiensis大鼠單核趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)

線形大洋螺菌Bacillus coagulans大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

Janibacter melonisBacillus thuringiensis大鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

豬鏈球菌Bacillus cereus大鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)

抵抗抗體白蟻梭菌鏈球菌

細胞周期檢控Rad17蛋白抗體復制因子C馬瑞氏熱厭氧桿菌坂崎腸桿菌

S6核糖體蛋白抗體夾膜紅細菌馬德利亞沙門氏菌

細胞周期檢查控制蛋白質抗體類球紅細菌雷丁沙門氏菌
PI3K γ和δ抑制劑（TG100-115）輪蟲弧曲札茋

哈茨木霉車葉草

肺炎克雷伯氏冬青A,

發白色紅曲霉毛冬青皂甲

木糖葡萄球弗羅利辛

越南芽孢桿石當歸

熱栗色鏈霉表蘇木

曲霉 5,7-二羥基-4-甲基

短柄帚霉 6-羥基-7-甲氧基-4-苯基;黃檀

巨大芽胞桿 4-苯基瑞香7-甲基

韓國假單胞 7,8-二羥基-4-苯基

薄層屬 4-甲基瑞香7-甲基

釀酒酵母 7,8-二羥基-4-甲基

植物乳桿 6,7-二羥基-4-(三氟甲基)

釀酒酵母 6,7-二羥基-4苯基
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)