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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-18 10:03:41瀏覽次數(shù):193次

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貨號(hào) FS-X10218
Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑)正在熱銷的產(chǎn)品:Phospho-HER2(Tyr1221/1222)/FITC 熒光標(biāo)記化HER2受體抗體IgG異丁 Standard for GC,>99%(GC)
Phospho-HER2(Tyr1112) /FITC 熒光標(biāo)記化HER2受體抗體IgG5-壬酮 98%
Phospho-HER2(Tyr1248) /FITC 熒光標(biāo)記化H

中文名稱:Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑)

英文名稱:Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK

產(chǎn)品規(guī)格:20μl

貨號(hào):FS-X10218

產(chǎn)品介紹:

英文名稱:Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK

產(chǎn)品規(guī)格:20μl

濃度:5mM in DMSO

分子式:C21H28FN3O7

分子量:453.5

含量:77~97%(TLC)

純度:≥92%(HPLC)

儲(chǔ)存:-20℃,有效期6個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

蕈狀芽孢桿菌胰高血糖樣肽-1抗體Human Syntaxin 6 大鼠基質(zhì)金屬蛋白7(MMP-7)免疫試劑盒

蘇云金芽孢桿菌顆粒蛋白前體抗體Human TADA2B 大鼠基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)免疫試劑盒

硬結(jié)節(jié)桿菌磷脂酰基蛋白聚糖1抗體Human STX1A(Syntaxin-1A) 大鼠基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)免疫試劑盒

鞘菌糖原合激3α抗體Human TADA2L 大鼠基質(zhì)金屬蛋白3(MMP-3)免疫試劑盒

*灰葡萄孢慶大霉單克抗體Human TADA3L 大鼠基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒

糞腸球菌硫轉(zhuǎn)移ω1抗體Human TAF1L 大鼠基質(zhì)金屬蛋白14(MMP-14)免疫試劑盒

毛霉屬間隙連接蛋白31抗體Human TAF1 大鼠基質(zhì)金屬蛋白13(MMP-13)免疫試劑盒

弓形蟲(GJS-3株)甘-N-甲基轉(zhuǎn)移Human TAF3 大鼠基質(zhì)金屬蛋白10(MMP-10)免疫試劑盒

北京擲孢酵母G蛋白偶聯(lián)受體75抗體Human TAF7 大鼠基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1/Collagenase I)免疫試劑盒

蓋替隱球酵母GATA結(jié)合蛋白4抗體Human TAF6L 大鼠肌質(zhì)網(wǎng)膜鈣ATP(SERCA)免疫試劑盒

淺灰小雙孢菌兔抗γ1基丁抗體Human TAF5L 大鼠肌激同工MM(CK-MM)免疫試劑盒

廣西腐霉G蛋白偶聯(lián)受體GPR85蛋白抗體Human DNASE1(Deoxyribonuclease-1) 大鼠肌激同工MB(CK-MB)免疫試劑盒

黑曲霉慶大霉抗體Human TAF9(Transcription initiation factor TFIID subunit 9) 大鼠肌激同工BB(CK-BB)免疫試劑盒

空腸彎曲桿菌半乳糖凝集9抗體Human TAF9B 大鼠肌球蛋白(MYS)免疫試劑盒

緣毛殼促代謝型谷受體2+4抗體Human Syntaxin 10 大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)免疫試劑盒

鞘桿菌GPNMB抗體Human STX1A(Syntaxin-1A) 大鼠肌酐(Cr)免疫試劑盒

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%黃杞

天麻萌發(fā)菌Mycena│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)晶蘭

豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品8-O-乙酰山梔酯
Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制劑)橙色單胞 1,1-環(huán)烷二甲果糖

糞產(chǎn)堿桿* 2-環(huán)己基-2-羥基硫化氫

旱生紅曲霉 4-乙氧羰基苯抗肽LL-37

空腸彎曲桿 2,2,2-三氟乙基對(duì)甲苯磺酯血管緊張II

熒光假單胞桿 6-(5--2-吡啶基)-5H-吡咯并[3,4-b]吡-5,7(6H)-二酮過(guò)氧化物

大腸埃希 支原體

金針菇—金白1號(hào) 4,6-二-5-硝基嘧啶泰澤病原體

Actinomadura amylolytica 1,1-二溴-3,3,3-三氟酮弓形蟲

糙皮側(cè)耳 2-酰噻唑呼腸弧病3

小麥蒼白桿 叔丁氧羰基氨氧基乙肝炎病

栗疫 1-丁基-2-甲基肺炎病

腐生葡萄球 4--6-甲氧基喹啉鼠痘病

豇豆慢生根瘤 2-溴-4甲基芐細(xì)小病

大腸埃希氏 1-庚烷蛋白質(zhì)羰基

耶爾森氏 3,4-噻吩二羧8-異構(gòu)前列腺

 


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