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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> WNT抑制劑(CCT251545)
貨號(hào) | FS-X10779 |
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中文名稱:WNT抑制劑(CCT251545)
英文名稱:CCT251545
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10779
產(chǎn)品介紹:
CCT251545是一種有效的WNT抑制劑,IC50值為5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1661839-45-7 純度:98.48% 分子量:421.92 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母(有現(xiàn)成的)金標(biāo)記兔抗 (10nm/15nm)Anti-KIR3DL3 Antibody人EB病IgA(EBv IgA)
總狀共頭霉金標(biāo)記親合(10nm/15nm)Anti-KIT Antibody人EB病IgA(EBv IgA)
褐環(huán)乳牛肝菌金標(biāo)記蛋白A(10nm/15nm)Anti-KLF1 Antibody人EB病IgG(EBv IgG)
頂頭孢霉羊抗AAnti-KLF1 Antibody人EB病IgG(EBv IgG)
大豆慢生根瘤菌兔抗人k-鏈Anti-KLF10/11 Antibody人利什曼原蟲抗體(Leishimaria Ab)
油菜菌核病菌Anti-KLF11 Antibody人利什曼原蟲抗體(Leishimaria Ab)
哈茨木霉Anti-KLF12 Antibody人登革熱抗體(DF-Ab)
ActinophytocolaAnti-KLF7 Antibody人登革熱抗體(DF-Ab)
乳乳球菌乳亞種Anti-KLHL29 Antibody人流感病抗體IgG(FLU)
膠紅酵母Anti-KLHL3 Antibody人流感病抗體IgG(FLU)
蠟狀芽孢桿菌Anti-KLKB1 Antibody人腺病IgM(ADV-IgM)
嗜氣薄層菌Anti-KLHL29 Antibody人腺病IgM(ADV-IgM)
Bacillus Anti-KLRB1C Antibody人腺病IgG(ADV-IgG)
微桿菌Anti-KLRC1 Antibody人腺病IgG(ADV-IgG)
伯氏疏螺旋體*兔白介1βAnti-KMT2A Antibody人輪狀病(RV)IgM
*匍枝根霉人原鈣黏1Anti-KMO Antibody人輪狀病(RV)IgM
RAS的GTP激活蛋白抗體菅囊酵母人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞
β淀粉樣蛋白前體結(jié)合蛋白B-1抗體亞膜漢遜酵母人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移)
ras癌基因家族Rab2抗體施氏漢遜酵母人腎端小管上皮細(xì)胞
胰島細(xì)胞再生因子ICRF抗體異常漢遜酵母變種人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
WNT抑制劑(CCT251545)松針層孔 改良馬丁培養(yǎng)基顆粒球蛋白E
枯草芽孢桿 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基顆粒球蛋白G
球孢白僵 胰蛋白胨大豆肉湯顆粒球蛋白M
亞側(cè)耳 李氏增肉湯(LB1,LB2)基礎(chǔ)顆粒腦鈉;腦鈉尿肽
假單胞屬 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)顆粒腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子
Paenibacillus 3%堿性蛋白胨水顆粒內(nèi)
堿性蛋白胨水顆粒內(nèi)皮
蘭鏈霉 SS瓊脂顆粒內(nèi)皮1
蠟狀芽孢桿 EC肉湯顆粒尿肌酐
谷棒桿 改良EC肉湯(mEC+n)顆粒尿激型纖溶原激活物
少根根霉 TCBS瓊脂顆粒尿氮
酮丁梭 改良月桂基硫鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉,(mLST-Vm)顆粒凝血抗凝血復(fù)合物
枯草芽孢桿 含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉湯(TSB-YE)顆粒凝血原片段F1+2
牛肝屬 Fraser培養(yǎng)基顆粒Ⅱ
Bacillus safensis Half-Fraser培養(yǎng)基顆粒皮質(zhì)
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