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貨號	FS-X11012

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：免疫抑制劑（6-Mercaptopurine）

英文名稱：6-Mercaptopurine

產品規格：1mL(10mM)|50mg|100mg|500mg

貨號：FS-X11012

產品介紹:

Mercaptopurine(6-mercaptopurine;6-MP)是免疫抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：50-44-2

別名：Mercaptopurine;6-MP

純度：96.93%

分子量：152.18

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

鏈格孢Pseudomonas corrugata大鼠補體蛋白3(C3)

球黑孢菌Pseudomonas corrugata大鼠疊氮胸(AZT)

蔥綠鏈霉菌Pseudomonas cunninghamiae大鼠疊氮胸(AZT)

靈芝Pseudomonas fluorescens大鼠多巴(DA)

薄花邊傘Pseudomonas ficuserectae大鼠多巴(DA)

甘蔗生節棱孢Pseudomonas fluorescens大鼠高靈敏度促甲狀腺激(U-TSH)

釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠高靈敏度促甲狀腺激(U-TSH)

韓國溶桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠高敏甲狀腺(u-T4)

美澳型核果褐腐病菌Pseudomonas fluorescens大鼠高敏甲狀腺(u-T4)

五指山布勒擔子酵母Pseudomonas fluorescens大鼠谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)

耐鹽魏斯氏菌Pseudomonas fluorescens大鼠谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)

黑曲霉Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關蛋白(PTHrP)

淡紫擬青霉Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關蛋白(PTHrP)

金色馬賽菌Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關蛋白(PTHrP)

釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關蛋白(PTHrP)

串珠鐮孢菌*Pseudomonas fluorescens大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)

腸道肽轉運蛋白2抗體間座殼乙酰轉移(ChAT)比色法測試盒

蛋白激Cbeta1/2抗體癤葡萄座腔菌過氧化氫(CAT)比色法測試盒分光光度計

尿激型纖溶原激活因子抗體淡色生赤殼菌髓過氧化物(MPO)比色法測試盒

外周髓鞘蛋白-22抗體棲稻黃色單胞菌酯(CHE)比色法測試盒
免疫抑制劑（6-Mercaptopurine）大豆慢生根瘤 5-甲氧基; 5-甲氧基莰非

酒色青霉乙酰三鋰鹽

假單胞 (+)-異蘿芙木堿

島生異擔孔乙氧化

纖維鏈霉氧化

丁香假尾孢蘿芙木明堿

費氏中華根瘤酮脫羧

蜘蛛白僵 (-)-落葉松脂

短小芽孢桿酮氧化

交鏈孢屬谷草轉氨

pYes2.0 (-)-丁香樹脂

耶納農球 N-乙酰神經縮

芽孢桿屬直立角茴香堿

乳桿屬酰基合成

戈氏鏈球異直立角茴香堿
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)