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貨號(hào)	FS-X11012

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：免疫抑制劑（6-Mercaptopurine）

英文名稱：6-Mercaptopurine

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|50mg|100mg|500mg

貨號(hào)：FS-X11012

產(chǎn)品介紹:

Mercaptopurine(6-mercaptopurine;6-MP)是免疫抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：50-44-2

別名：Mercaptopurine;6-MP

純度：96.93%

分子量：152.18

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

鏈格孢Pseudomonas corrugata大鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)

球黑孢菌Pseudomonas corrugata大鼠疊氮胸(AZT)

蔥綠鏈霉菌Pseudomonas cunninghamiae大鼠疊氮胸(AZT)

靈芝Pseudomonas fluorescens大鼠多巴(DA)

薄花邊傘Pseudomonas ficuserectae大鼠多巴(DA)

甘蔗生節(jié)棱孢Pseudomonas fluorescens大鼠高靈敏度促甲狀腺激(U-TSH)

釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠高靈敏度促甲狀腺激(U-TSH)

韓國(guó)溶桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠高敏甲狀腺(u-T4)

美澳型核果褐腐病菌Pseudomonas fluorescens大鼠高敏甲狀腺(u-T4)

五指山布勒擔(dān)子酵母Pseudomonas fluorescens大鼠谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)

耐鹽魏斯氏菌Pseudomonas fluorescens大鼠谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)

黑曲霉Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)

淡紫擬青霉Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)

金色馬賽菌Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)

釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)

串珠鐮孢菌*Pseudomonas fluorescens大鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)

腸道肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體間座殼乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)比色法測(cè)試盒

蛋白激Cbeta1/2抗體癤葡萄座腔菌過氧化氫(CAT)比色法測(cè)試盒分光光度計(jì)

尿激型纖溶原激活因子抗體淡色生赤殼菌髓過氧化物(MPO)比色法測(cè)試盒

外周髓鞘蛋白-22抗體棲稻黃色單胞菌酯(CHE)比色法測(cè)試盒
免疫抑制劑（6-Mercaptopurine）大豆慢生根瘤 5-甲氧基; 5-甲氧基莰非

酒色青霉乙酰三鋰鹽

假單胞 (+)-異蘿芙木堿

島生異擔(dān)孔乙氧化

纖維鏈霉氧化

丁香假尾孢蘿芙木明堿

費(fèi)氏中華根瘤酮脫羧

蜘蛛白僵 (-)-落葉松脂

短小芽孢桿酮氧化

交鏈孢屬谷草轉(zhuǎn)氨

pYes2.0 (-)-丁香樹脂

耶納農(nóng)球 N-乙酰神經(jīng)縮

芽孢桿屬直立角茴香堿

乳桿屬酰基合成

戈氏鏈球異直立角茴香堿
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)