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BRAFV600E抑制劑(PLX8394)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-18 13:46:43瀏覽次數(shù):149次

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貨號 FS-X10418
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產品介紹:

英文名稱:PLX8394

產品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

PLX8394是一種有效的,選擇性的Raf抑制劑,能夠抑制BRAFV600E的活性,IC50值約為5nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:1393466-87-9

純度:98.44%

分子量:542.53

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

中文名稱:BRAFV600E抑制劑(PLX8394)

英文名稱:PLX8394

產品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10418

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

金乳牛肝菌豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍耳病病抗體Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)

美澳型核果褐腐病菌凋亡相關蛋白10抗體Anti-BAG1 Antibodyγ谷酰轉移(GGT)

美澳型核果褐腐病菌鈣調蛋白依賴性蛋白激磷抗體Anti-BAG1 Antibodyγ-谷酰環(huán)化轉移(GGCT)

門多薩假單胞菌絲/蘇蛋白激PIM3抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷酰半胱合成(γ-ECS)

蠟樣芽孢桿菌組蛋白精甲基轉移5抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷-半胱合成(γ-GCS)

熱帶假絲酵母原鈣粘附蛋白11X抗體Anti-BAG3 Antibodyγ干擾誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)

粉紅聚端孢霉原鈣粘附蛋白11Y抗體Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干擾誘導單核因子(MIGF/CXCL9)

暗褐色毛霉原鈣粘附蛋白12/血管內皮鈣粘蛋白2抗體Anti-BAG6 Antibodyγ干擾受體(IFN-γR)

枯草芽孢桿菌原鈣粘附蛋白17抗體Anti-BAP1 Antibodyγ干擾(IFN-γ)

三葉草根瘤菌原鈣粘附蛋白1抗體Anti-BAX Antibodyγ干擾(IFNγ)

杰丁畢赤酵母原鈣粘附蛋白α1抗體Anti-BAK1 Antibodyγ分泌激活蛋白(PION)

深紅原鈣粘附蛋白α3抗體Anti-BAMBI Antibodyγ基丁(GABA)

金龜子綠僵菌原鈣粘附蛋白α4抗體Anti-BAX Antibodyβ-轉導重復序列包含蛋白(BTRC)

短乳桿菌原鈣粘附蛋白α5抗體Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)

發(fā)酵假絲酵母原鈣粘附蛋白α9抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)

側毛殼原鈣粘附蛋白α7抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品,還原型

巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質量規(guī)格:純度大于98%,BR

干酪乳桿菌假植物亞種Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 質量規(guī)格:>99%,BR
BRAFV600E抑制劑(PLX8394)茶樹菇 3--4-(三氟甲基)苯絲織蛋白1

綠木霉 2-羥基三氟甲苯氨基己糖

托姆青霉 環(huán)己基色P4502B1

松口蘑 6-吡啶-3-有機陰離子轉運體2

蒙氏假單胞 三(4-嗎啉基)氧化膦直接高密度脂蛋白膽固

乳鏈球 2-氟-6-甲苯尿肌酐

德氏乳桿 3,4-己二酮微管相關蛋白輕鏈3

峽灣嗜冷桿 (S)-(-)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二(3,5-二甲苯基)膦-3,3′-聯(lián)吡Adropin蛋白

茄鐮孢 (R)-(+)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二(3,5-二甲苯基)膦-3,3′-聯(lián)吡磷化信號傳導子及轉錄激活子3

酒紅鏈霉 碳乙烯亞乙酯活性氮簇

云芝栓孔(變色栓) 二苯基酐膠原吡啶交聯(lián)

靈芝屬 胡椒脫氧膠原吡啶交聯(lián)

銅綠假單胞 環(huán)丁抗N-甲基-D-天冬受體1

泰國葡糖桿 2-苯并咪唑基乙抗N-甲基-D-天冬受體2B

中慢生華癸根瘤 2-苯二甲酰亞氨基乙烷磺酰軟骨846

 


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