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貨號	FS-X11033

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：ALK抑制劑(Ensartinib)

英文名稱：Ensartinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X11033

產(chǎn)品介紹:

Ensartinib是一種有效的ALK抑制劑，用于治療非小細(xì)胞肺癌。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1365267-27-1

別名：X-396

純度：98.02%

分子量：547.41

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蘑菇Rhodopseudomonas palustris大鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)

桿菌Rhodobacter sphaeroides大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)

光硬皮馬勃Rhodobacter sphaeroides大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)

盤長孢狀盤孢Bifidobacterium longum subsp. sius大鼠6前列腺(6-K-PG)

釀酒酵母Bifidobacterium pseudolongum subsp. pseudolongum大鼠6前列腺(6-K-PG)

臭椿尾孢菌Bifidobacterium longum subsp. longum大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)

HalomonasBifidobacterium magnum大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)

球孢白僵菌Bifidobacterium dentium大鼠載脂蛋白B0(apo-B0)

拉浩爾谷農(nóng)球菌Bifidobacterium adolescentis大鼠載脂蛋白B0(apo-B0)

棲熱菌屬Rhodovulum sulfidophilum大鼠25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)

假根蘑菇Rhodopseudomonas sp.大鼠25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)

黑曲霉Rhodocista pekingensis大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)

鮑魚側(cè)耳Rhodobium marinum大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)

謝瓦曲霉Blastochloris viridis大鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)

蘇云金芽孢桿菌Bifidobacterium catenulatum大鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)

中間氣單胞菌Haloferax denitrificans大鼠維生C(VC)

核糖核還原亞基R2抗體平菇禽腺病毒(3型)

Rho相關(guān)蛋白激2抗體銀絲草菇傳染性喉氣管炎病毒

G蛋白信號調(diào)節(jié)因子14抗體佛羅里達(dá)側(cè)耳家蠶微孢子蟲CQ1株

核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB受體抗體核因子kB受體活化因子粉褶側(cè)耳巨型艾美耳球蟲
ALK抑制劑(Ensartinib)矩圓黑盤孢降氧化北美黃連次堿

谷棒桿異胡豆

腐皮殼珊瑚菜

海泥黃桿鳳仙萜四C

白球擬酵母 α-雙氫

大腸埃希升麻升麻

炭疽芽胞桿丹參B

魚肉揮發(fā)性鹽基氮化矢車菊-3-O-槐糖

熱帶假絲酵母環(huán)氧長春堿，長春

栗疫丁香亭-3-O-葡糖

聚生殼長春地辛

慢葡萄球五內(nèi)脂

竹針孢座囊重樓皂F

嬰兒配方乳粉、鈉、鈣、鎂、銅、鐵、鋅、磷、、 -硝基

果生鏈核盤 -硝基
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)