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貨號	FS-X10441

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：缺氧誘導(dǎo)因子-1α抑制劑(HIF-1α)(PX-478)

英文名稱：PX-478

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10441

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：PX-478

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

PX-478是一種缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)抑制劑，在常氧和缺氧條件下對各種癌細(xì)胞系具有細(xì)胞毒性，IC50為20-30μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：685898-44-6

純度：98.0%

分子量：394.12

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

戊糖乳桿菌輔肌動(dòng)蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體Anti-CD40LG AntibodyⅠ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(CTX-I)

Brenneria salicis 前動(dòng)力蛋白2抗體Anti-CD44 Antibody(PB0287)Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)

稻草假單胞菌前列腺癌和癌高表達(dá)蛋白抗體Anti-CD46 AntibodyⅠ型膠原N末端肽(NTX)

平菇腫瘤抑制基因PHLPP抗體Anti-CD46 Antibody(PB0507)Ⅰ型膠原C端肽(ICTP)

根際假單胞菌脯脫氫抗體Anti-CD47 AntibodyⅠ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

地衣芽胞桿菌蛋白調(diào)解因子8抗體Anti-CD5 AntibodyⅠ型膠原C 端肽(CTX-Ⅰ)

宇佐美曲霉蛋白C抑制因子抗體Anti-CD48 AntibodyⅠ型膠原(ColⅠ)

黃曲霉原鈣粘蛋白γB5抗體Anti-CD47 AntibodyⅠ型膠原(Col Ⅰ)

生孢梭菌蛋白體PSMα5抗體Anti-CD5 Antibody8異前列腺F2α(8-isoPGF2α)

東京根霉含patatin樣磷脂6抗體Anti-CD5 Antibody8異前列腺F2α(8-iso-PGF2a)

金頂側(cè)耳神經(jīng)叢蛋白A4抗體Anti-CD47 Antibody8異前列腺(8-iso-PG)

谷棒桿菌多形性腺瘤基因樣蛋白2抗體Anti-CD48 Antibody8-異構(gòu)前列腺F2α(8-epi-PGF2α)

淡紫青鏈霉菌表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體Anti-CD5 Antibody8羥基脫氧鳥(8-OHdG)

亞羅克魯維酵母磷化心臟磷蛋白抗體Anti-CD5 Antibody8-羥基鳥DNA糖(OGG1)

費(fèi)氏中華根瘤菌磷化心臟磷蛋白抗體Anti-CD5 Antibody6前列腺F1a(6-keto-PGF1a)

煙草疫霉蛋白酪磷樣N前體蛋白抗體Anti-CD59 Antibody6前列腺(6-K-PG)

薰衣草色鏈霉菌Streptomyces│lavendulocolor 質(zhì)量規(guī)格：0.98

油白蘑Tricholoma│equestre var. equestre (L.) P. Kumm. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
缺氧誘導(dǎo)因子-1α抑制劑(HIF-1α)(PX-478)樹舌 1,3-二-4,6-二c-fos

冷彎曲 2,4-二羰基庚乙酯S100鈣結(jié)合蛋白A8復(fù)合物

釀酒酵母 3-溴-4-羥基吡啶磷脂酰

擲孢酵母 4-溴-2-羥基吡啶性磷

玫煙色擬青霉（10個(gè)工作日） 2-氟-4-鎖鏈

黃曲霉九氟丁基磺酐酮體

赤霉屬 4-(三氟甲基)苯肼隱熱蛋白

葫蘆小叢殼釷試劑羥脯

釀酒酵母 3-氨基烷磺Ⅱ型前膠原羧基端肽

枯草芽孢桿 1-[3,5-雙(三氟甲基)苯基]乙12S-羥化二十碳四烯

長白山傘枝霉 2-溴喹喔啉結(jié)核桿

巨大芽孢桿 3,5-二氨基三氟甲苯γ氨基丁轉(zhuǎn)氨

放射形根瘤三乙基氧四氟抗內(nèi)膜抗體

阿魏側(cè)耳-天山2號三乙基氧四氟前列腺性磷

淡紫擬青霉異魯諾可溶性生激表達(dá)基因2蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)