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貨號	FS-X10548

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：缺氧誘導因子-1抑制劑(HIF-1抑制劑)

英文名稱：BAY 87-2243

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10548

產品介紹:

BAY87-2243是一種有效的選擇性的缺氧誘導因子-1(HIF-1)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1227158-85-1

純度：99.41%

分子量：525.53

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

毛柄金錢菌(金針菇)血管內皮粘附分子抗體Anti-MAPK6 Antibody溶質載體家族30成員8(SLC30A8)

蛾微桿菌血管內皮生長因子抗體Anti-MAPK6 Antibody(PB0706)溶質載體家族26成員4(SLC26A4)

假土曲霉血管內皮生長因子受體1抗體Anti-MAPK3 Antibody溶質載體家族1成員5(SLC1A5)

里亞氏須腹菌血管內皮生長因子受體2抗體Anti-MAPK6 Antibody溶質載體家族16成員3(SLC16A3)

美澳型核果褐腐病菌血管內皮生長因子受體3抗體Anti-MAPK8 Antibody溶質載體家族16成員1(SLC16A1)

釀酒酵母波形蛋白抗體Anti-MAPT Antibody溶血酰基轉移4(LPCAT4)

淡紫擬青霉血管活性腸肽抗體Anti-MAPK8 Antibody溶血酰基轉移3(LPCAT3)

球形芽孢桿菌內脂/內臟脂肪/前B克增強因子1抗體Anti-MAS1 Antibody溶血酰基轉移2(LPCAT2)

哈茨木霉內脂/內臟脂肪/前B克增強因子1抗體Anti-MAPK9 Antibody溶血酰基轉移1(LPCAT1)

鐮刀菌屬玻璃粘連蛋白抗體Anti-MASP2 Antibody溶血磷脂酰乙酰基轉移1(LPEAT1)

枯草芽孢桿菌血管內皮生長因子A抗體Anti-MAVS Antibody溶血磷脂酰肌酰基轉移(LPIAT)

蠟狀芽孢桿菌血管內皮生長因子B抗體Anti-MATN3 Antibody溶血磷脂酰甘油酰基轉移1(LPGAT1)

露濕擬漆斑菌VAMP1囊泡相關膜蛋白1抗體Anti-MB Antibody溶血磷脂受體3(LPAR3)

黃多孔菌囊泡相關膜蛋白2抗體Anti-MAX Antibody溶血磷脂受體1(LPAR1)

龜裂鏈霉菌龜裂亞種基丁轉運蛋白VGAT抗體Anti-MB Antibody溶血磷脂Ⅲ(LYPLA3)

少根根霉戴爾變種氫離子轉運ATP合成A1抗體Anti-MBD1 Antibody溶血磷脂Ⅱ(LYPLA2)

硫軟骨多糖核心蛋白抗體腸乳桿菌大鼠小腦顆粒細胞

線粒體載體腺核轉運蛋白6抗體沼澤考克氏菌大鼠神經元細胞

Bcl2結合抗凋亡蛋白4抗體都柏林沙門氏菌大鼠嗅鞘細胞

分泌型白細胞蛋白抑制因子抗體腸沙門氏菌腸亞種雞血清型大鼠神經星形膠質細胞
缺氧誘導因子-1抑制劑(HIF-1抑制劑)芽孢桿屬 3,5-二甲氧基肉桂，主要為反式D-乳

大腸埃希氏桿 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (sodium sal雄烯二酮

三化金溶液二氫睪酮

平菇 N-(3-Oxododecanoyl)-L-homoserine lactone雌三

綠膿桿四乙基硫氫雌酮

假單胞屬六鋨Ⅰ型前膠原C末端肽

猴頭菇 (S)-1-芐基-3-氨基卵黃球蛋白

班戈錯湖嗜鹽堿紅 (R)-3-氨基-1-芐基抗凝血Ⅲ

新疆鹽地桿 2,3-二苯基喹喔啉H9型病抗體

楊奇青霉對甲苯磺銀羥賴吡啶啉

長雙歧桿嬰兒亞種 5,10,15,20-四(4-吡啶基)卟啉還原糖

鏈格孢 3,4-二氟苯過氧化物

金黃色葡萄球RN4220 (+)-2-甲基-L-絲無翅型MMTV整合位點家族成員4

芽孢桿屬 5-溴-2-苯甲骨堿性磷

鹽生鹽古桿 6,7-二氫-4(5H)-苯并呋喃酮I型前膠原N端前肽
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)