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貨號	FS-X10620

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：CDK1/CDK2/CDK9抑制劑(AZD-5438)

英文名稱：AZD-5438

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10620

產品介紹:

AZD-5438是一種有效的CDK1/2/9抑制劑，IC50值分別為16nM/6nM/20nM；同時抑制GSK3β，對CDK5/6的作用較弱。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：602306-29-6

純度：99.84%

分子量：371.46

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

巨大芽孢桿菌羅丹明標記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A4 Antibody含Rho關聯卷曲螺旋蛋白激2(Rock2)

放射形根瘤菌辣根過氧化物標記的兔抗小鼠IgGAnti-SLC2A4 Antibody(PB0143)含RCC1和BTB域蛋白2(RCBTB2)

阿魏側耳-天山2號辣根過氧化物標記的小鼠抗大鼠IgGAnti-SLC2A5 Antibody含PR域蛋白10(PRDM10)

淡紫擬青霉PE-Cy7標記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A5 Antibody含MOCO硫化羧基端域蛋白1(MOSC1)

球色單隔孢屬辣根過氧化物標記的兔抗猴IgGAnti-SLC2A5 Antibody含MANSC域蛋白1(MANSC1)

植物乳桿菌堿性磷（AP）標記的兔抗大鼠IgMAnti-SLC2A6 Antibody含Kazal型絲蛋白抑制劑域蛋白1(KAZALD1)

登戶鏈霉菌Alexa Fluor 555標記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A9 Antibody含FYVE域鋅指蛋白27(ZFYVE27)

海考克氏菌Alexa Fluor 647標記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A8 Antibody含FYVE域鋅指蛋白26(ZFYVE26)

枯草芽孢桿菌PE-Cy5.5標記的小鼠抗兔IgMAnti-SLC2A9 Antibody含FYVE域鋅指蛋白16(ZFYVE16)

黑曲霉堿性磷（AP）標記的兔抗馬IgMAnti-SLC31A1 Antibody含CUB域蛋白1(CDCP1)

赭曲霉膠體金標記的兔抗馬IgMAnti-SLC2A9 Antibody(PB0915)含BED型鋅指蛋白3(ZBED3)

柿瑞恩氏酵母Alexa Fluor 647標記的兔抗馬IgMAnti-SLC30A4 Antibody含Ⅲ型纖連蛋白域蛋白5(FNDC5)

放射型根瘤菌APC標記的兔抗馬IgMAnti-SLC31A1 Antibody海藻糖(TREH)

都濃哈馬達氏菌Alexa Fluor 350標記的兔抗馬IgMAnti-SLC34A2 Antibody海馬鈣蛋白(HPCA)

蘇云金芽孢桿菌Alexa Fluor 488標記的兔抗馬IgMAnti-SLC39A6 Antibody過氧化物體增殖物激活受體δ(PPARδ)

局限青霉Alexa Fluor 555標記的兔抗馬IgMAnti-SLC4A1 Antibody(PB0393)過氧化物體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)

NYS48蛋白抗體威氏李斯特氏菌大鼠乳腺上皮細胞提取物

肌痙攣性癲癇病相關EPM2蛋白抗體布氏假單胞菌大鼠淋巴成纖維細胞提取物

非霍奇金淋巴瘤重復蛋白2抗體佐氏庫特氏菌大鼠子宮內膜上皮細胞提取物

非霍奇金淋巴瘤重復蛋白3抗體熱帶伯克霍爾德氏菌大鼠卵巢成纖維細胞提取物
CDK1/CDK2/CDK9抑制劑(AZD-5438)嗜堿芽孢桿 2,5-二甲基布魯氏

皺膜假絲酵母 2-羥基喹喔啉傳染性鼻肺炎

黃曲霉 1-(2,3-二)哌鹽鹽溶

紅城紅球茴香偶姻弓形蟲IgG

枯草芽孢桿枯草亞種 2-甲氧基-5-褪黑

有害片球四氫-2 2-二甲基-4H-吡喃-4-酮多巴

Bradyrhizobium Bradyrhizobium 3-奎寧環酮鹽鹽色C

桃吉爾霉甲基吡咯-2-羧酯CD40配體

惡臭假單胞 4,6-二嘧啶皮質

松鼠葡萄球 Rocuronium Bromide前列腺E2

蔥 3-正十六烷基噻吩I型膠原蛋白

大腸埃希氏 (S)-(-)-2-(二苯甲基)吡咯烷雌三

世紀紅簍環丁酮雌酮

蠟蚧輪枝孢 4-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)苯馬烯雌酮

假單胞 1，10-癸二硫促腎上腺皮質
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)