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貨號 | FS-X10536 |
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產品介紹:
Honokiol是Akt抑制劑,能夠抑制Akt的活化,同時能夠增強ERK1/2的磷酸化。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:35354-74-6 別名:NSC 293100 純度:99.71% 分子量:266.33 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:Akt活化抑制劑(Honokiol)
英文名稱:Honokiol
產品規格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10536
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
不動桿菌馬鈴薯球蛋白(結節性硬化)抗體Anti-KLF8 Antibody視黃脫氫12(RDH12)
蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種磷化馬鈴薯球蛋白(結節性硬化)抗體Anti-KLF5 Antibody視黃脫氫11(RDH11)
變形假單胞菌磷化馬鈴薯球蛋白(結節性硬化)抗體Anti-KLF6 Antibody視黃脫氫10(RDH10)
異常漢遜酵母磷化馬鈴薯球蛋白(結節性硬化)抗體Anti-KLK1 Antibody視黃結合蛋白3(RBP3)
圓錐節叢孢磷化馬鈴薯球蛋白(結節性硬化)抗體Anti-KLK1 Antibody視黃結合蛋白1(RBP1)
鏈狀鐮孢磷化馬鈴薯球蛋白(結節性硬化)抗體Anti-KLK1 Antibody視黃飽和(RETSAT)
木糖葡糖醋桿菌磷化微管相關蛋白抗體Anti-KLK1 Antibody視蛋白5(OPN5)
光帽鱗傘(滑菇)非受體型酪蛋白激Tnk1抗體Anti-KLK1 Antibody視蛋白4(OPN4)
大腸埃希氏菌磷化非受體型酪蛋白激Tnk1抗體Anti-KLK10 Antibody視蛋白3(OPN3)
黏液桿菌磷化DNA拓普西異構Ⅱ抗體Anti-KLK1 Antibody矢車菊δ3(CENTδ3)
禿裸鏈霉菌環腺應答元件結合蛋白轉錄共激活因子TORC1抗體Anti-KLK2 Antibody矢車菊δ2(CENTδ2)
水質糞大腸菌群質控樣品(多管發酵法)磷化CREB轉錄共激活因子TORC1抗體Anti-KLK3 Antibody矢車菊δ1(CENTδ1)
*蜜環菌CREB轉錄共激活因子TORC2抗體Anti-KLK2 Antibody矢車菊γ3(CENTγ3)
鏈霉菌腫瘤壞死因子β抗體(TNFβ)Anti-KLK11 Antibody矢車菊γ2(CENTγ2)
芽孢桿菌轉錄因子7類似物2抗體Anti-KLK4 Antibody矢車菊γ1(CENTγ1)
茯苓血栓B2(一種新發現的抑癌基因)抗體Anti-KLK8 Antibody矢車菊β6(CENTβ6)
抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體流感嗜血桿菌大鼠肺成纖維細胞
脫髓鞘相關蛋白SH3TC2N抗體嗜根考克氏菌大鼠支氣管平滑肌細胞
富含脯突觸相關蛋白SHANK2抗體大腸埃希氏菌O157大鼠小腸上皮細胞
線性泛鏈相關蛋白SHARPIN抗體哈維氏弧菌大鼠直腸平滑肌細胞
Akt活化抑制劑(Honokiol)淡黃青霉 1--2-硅基乙炔胰島
槐栓 對氨基叔丁酯胰島生長因子1
枯草芽胞桿 2--4-(三氟甲基)苯甲胰高血糖
芽孢桿 (11R,12R)-9,10-二氫-9,10-乙撐蒽-11,12-二游離脂肪
維多利亞維希尼克氏酵母 4-溴-N-Boc-誘導型NO合
微小鏈霉 N-Fmoc-N'-三苯甲基-D-天冬酰孕酮
細小磚紅鐮孢 4-羧基苯頻哪酯載脂蛋白A
沼澤類芽孢桿 甲基烯2-乙磺酯鈉鹽(SSEM)脂蛋白脂
不動桿 3-溴-5-氟苯脂多糖
黃曲霉 5-溴-2-氟苯脂聯
大腸埃希氏 Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-oc腫瘤壞死因子α
釀酒酵母 3,6-二溴噠腫瘤壞死因子β
香菇 6,7-二甲氧乙氧基喹唑啉-4-酮主要組織相容性復合體Ⅱ類
大腸埃希氏 雙(二乙基氨基)偶膦轉化生長因子β1
英諾克李斯特氏 水合硫鋁轉化生長因子β3
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