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貨號 | FS-X10625 |
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產品介紹:
Pim1/AKK1-IN-1是一種有效的多種酶抑制劑,能夠作用于Pim1/AKK1/MST2/LKB1,Kd值分別為35nM/53nM/75nM/380nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1093222-27-5 別名:LKB1/AAK1 dual inhibitor 純度:98.10% 分子量:339.35 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱:Pim1/AKK1-IN-1
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10625
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
缺陷短波單胞菌Cy5.5標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS3 Antibody過氧化7(GPX7)
球毛殼菌Cy7標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS4 Antibody過氧化5(GPX5)
肉色諾卡氏菌PE標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS3 Antibody過氧化4(GPX4)
大奇異球菌PE-Cy3標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOCS5 Antibody過氧化1(GPX1)
枯草芽孢桿菌PE-CY5標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD1 AntibodyS轉移ω1(GSTω1)
雙孢鐮孢APC標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD2 AntibodyS轉移π1(GSTπ1)
林肯鏈霉菌Alexa Fluor 350標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD1 AntibodyS轉移μ2(GSTμ2)
毛頭鬼傘Alexa Fluor 488標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD2 Antibody(PB0454)S轉移κ1(GSTκ1)
牛奶 三聚Alexa Fluor 555標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD3 AntibodyS轉移θ2(GSTθ2)
新城疫病Alexa Fluor 647標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD3 AntibodyS轉移θ1(GSTθ1)
地下諾爾氏菌PE-Cy5.5標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOD3 AntibodyS轉移α5(GSTα5)
戊糖乳桿菌PE-Cy7標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SORBS1 AntibodyS轉移α4(GSTα4)
根瘤菌羅丹明標記的羊抗豚鼠IgGAnti-Sorbitol Dehydrogenase/SORD AntibodyS轉移α2(GSTα2)
人參地土地桿菌FITC標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SORBS3 AntibodyS轉移α1(GSTα1)
食砜節桿菌膠體金標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOX11 Antibody谷光甘肽合成(GSS)
芭蕉生粘鞭霉堿性磷(AP)標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SOX1 Antibody谷轉2(ALT2)
生長抑制蛋白NDN抗體煙色紅曲霉大鼠晶狀體上皮細胞提取物
鈉離子轉運蛋白抗體溝鯰愛德華氏菌大鼠脈絡膜血管細胞提取物
神經內分泌特異性蛋白2抗體變異庫克菌大鼠角膜成纖維細胞提取物
神經生長因子受體相關蛋白1抗體金灰青霉大鼠角膜上皮細胞提取物
Pim1/AKK1/MST2/LKB1抑制劑尼氏芽孢桿 馬心脂肪結合蛋白
樹舌4-1 酐馬結合珠蛋白;觸珠蛋白
產二鏈霉 4,4′,4″-三叔丁基-2,2′:6′,2″-三聯吡啶輔肌動蛋白α1
地衣芽孢桿 2-氟-4-三氟甲輔肌動蛋白α2
辣椒溶桿 2,5-二氟-4-(三氟甲基)苯轉錄激活因子-1
普通變形桿 D-3-轉錄激活因子-2
栗疫 L-4-三氟磷脂酰肌蛋白聚糖1
膠孢 BOC-D-3-磷脂酰肌蛋白聚糖4
Sphingobium francense BOC-D-3,4-二苯絡絲蛋白
奇異酵母 BOC-L-3-緊密連接蛋白
瘤孢梭孢殼 BOC-L-2-苯組織因子
長枝木霉 BOC-L-2-氟苯組織因子途徑抑制物
蠟葉曲霉 2-羥基-2-(三氟甲基)激錨定蛋白1
南方樹舌 (R)-(-)-1-苯甲基-3-氨基吡咯烷增殖誘導配體
深褐褶 (1S,2R)-2-(二丁氨基)-1-苯基-1-αL艾杜糖
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