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貨號	FS-X10458

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PI3K抑制劑(Quercetin)

英文名稱：Quercetin

產品規格：1mL(10mM)|1g|5g

貨號：FS-X10458

產品介紹:

英文名稱：Quercetin

產品規格：1mL(10mM)|1g|5g

Quercetin是一種天然黃酮類化合物，能夠刺激SIRT1，同時為PI3K的抑制劑，作用于PI3K γ,PI3K δ和PI3K β，IC50分別為2.4±0.6μM,3.0±0.0μM和5.4±0.3μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：117-39-5

純度：98.21%

分子量：302.24

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大洋芽孢桿菌腎/血管緊張形成Ren1抗體Anti-CSK Antibody(PB0129)轉鈷蛋白Ⅰ(TCN1)

枯草芽孢桿菌分泌性蛋白RSPO1抗體Anti-CST3 Antibody轉谷酰7(TGM7)

死亡谷芽孢桿菌RAS的GTP激活蛋白抗體Anti-CST3 Antibody轉谷酰6(TGM6)

異常威克漢姆酵母G蛋白P21 RAC2抗體Anti-CSTA Antibody轉谷酰5(TGM5)

玉蜀黍赤霉（麥類赤霉病菌）GTP結合蛋白RAC1+RAC2抗體Anti-CSTA Antibody筑絲蛋白5(TEKT5)

裂褶菌ras癌基因家族Rab8蛋白/原癌基因c MEL抗體Anti-CSTB Antibody筑絲蛋白4(TEKT4)

大孢長根菇ras癌基因家族Rab2抗體Anti-CSTA Antibody筑絲蛋白3(TEKT3)

苛求芽胞桿菌ras癌基因家族Rab3a抗體Anti-CSTB Antibody筑絲蛋白1(TEKT1)

解葡聚糖微桿菌ras癌基因家族Rab9蛋白抗體Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody主要堿性蛋白(MBP)

紅褐肉座菌ras癌基因家族RAB20抗體Anti-CSTB(Cystatin B) Antibody蛛受體3(LPHN3)

蘋果黑腐皮殼菌Ras樣蛋白A+B抗體Anti-CSTB Antibody蛛受體2(LPHN2)

綠色木霉Rad51抗體Anti-CTAG1A Antibody蛛受體1(LPHN1)

黃絮鱗鵝膏菌RNA結合蛋白片段Y染色體家族蛋白2抗體Anti-CTBP1 Antibody肘臀蛋白(CUBN)

茄勞爾氏菌RNA結合蛋白片段Y染色體家族蛋白1抗體Anti-CTBP1 Antibody(PB0400)軸突生長誘向因子G2(NtnG2)

無花果曲霉變種RNA聚合III抗體Anti-CTBP2 Antibody(PB0401)軸突生長誘向因子G1(NtnG1)

土生類諾卡氏菌磷化原癌基因c-Met相關酪激抗體Anti-CTCF Antibody軸突生長誘向因子5(Ntn5)

平菇Pleurotus│ostreatus (Jacq.) P. Kumm. 質量規格：0.99

紅緣層孔菌Fomes│pinicola (Sw.) Fr. 質量規格：0.98

蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質量規格：0.98
PI3K抑制劑(Quercetin)鹿皮色曲霉 BOC-β-a-羥丁脫氫

膠孢 2--4-(三氟甲基)嘧啶脂肪結合蛋白

擬莖點霉 L-氨酰-L-亮腫瘤壞死因子配體超家族成員11

根霉 D-亮氨酰-L-酪水合物氨甲酰磷合成

槐栓丁位壬內酯骨特異性堿性磷

松針散斑殼 6-羧基熒光氨甲酰磷合成1

菊池鏈格孢 1-三苯甲基咪唑-4-甲頂體

黑木耳 4-三氟甲硫基苯甲酰二酰基甘油酰基轉移1

卷曲鏈霉丹磺酰肼二酰基甘油酰基轉移2

厚環粘蓋牛肝環戊二烯基雙(三苯基膦)化釕(II)富亮α2糖蛋白1

高地芽孢桿 (1,5-己二烯)化銠(I)二聚體C1q腫瘤壞死因子相關蛋白3

土曲霉 2-氨基噻唑-5-羧乙酯血小板反應蛋白;凝血敏感蛋白1

立枯絲核 N-Boc-N'-三苯甲基-L-組血小板反應蛋白;凝血敏感蛋白

日本山茶盤孢 3，4，5-Trimethoxybenzhydrazide2,3-雙加氧1

白酒鄰苯二甲二異丁酯 DIBP、鄰苯二甲二丁酯 DBP、鄰苯二甲二（4- 甲基-2-戊基）酯 BMPP、鄰苯二甲二（2-乙氧基）乙酯 DEEP、鄰苯二甲二戊酯 DPP、鄰苯二甲二己酯 DHXP、鄰苯二甲丁基芐基酯 BBP、鄰苯二甲二（2-丁氧基）乙酯 DBEP、鄰苯二甲二環己酯 DCHP、鄰苯二甲二（α-乙基）己酯 DEHP、鄰苯二甲二苯酯、鄰苯二甲二正辛酯 DNOP、鄰苯二甲二甲酯 DMP、鄰苯二甲二乙脂（DEP）谷鈉利塞膦鹽半五水合物CD206分子
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)