Hi T7 RNA Polymerase

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商品介紹：

對(duì) T7 噬菌體啟動(dòng)子具有高度的特異性，并可以其作為啟動(dòng)子，DNA 作為模板體外合成正義鏈。雙鏈線性質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物均可作為該酶的底物模板。Hi T7 RNA 聚合酶經(jīng)電子重構(gòu)架及庫(kù)篩選，與 Wild型比較來看，酶的 DNA 模板結(jié)合區(qū)域親和力更高，使其具有持續(xù)合成能力，從而獲得更高的產(chǎn)量，并易于長(zhǎng)片段RNA 的合成。該酶為重組純化制品，無 DNase 和 RNase污染。

活性定義：在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下，37℃ 1 小時(shí)內(nèi)將 1 nmol的 ATP 摻入酸不溶物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。
儲(chǔ)存：置于-20°C 可保存 2 年，如有白色沉淀析出，37°C溫浴 5min 后使用，不影響性能。
熱失活：75°C，10min。

2. 37℃孵育 2-3h (通常 3h，即可獲得>80 μg 的總產(chǎn)量)。
3. 反應(yīng)完畢后，如需去除模板 DNA，加入 Dnase I（2U）37℃處理 15min。
4. 終止反應(yīng)：75℃加熱 10min，或加入 2 μl 0.5M 的 EDTA(pH8.0)。
注意事項(xiàng)
1.質(zhì)粒DNA的質(zhì)量影響RNA的量和完整性。質(zhì)粒DNA的濃度越高，生成RNA的質(zhì)量越高，質(zhì)粒模板DNA應(yīng)該無RNase污染.
2.該酶為高產(chǎn)酶，RNA 產(chǎn)量高，在反應(yīng)完畢后，通常存在肉眼可見的渾濁狀態(tài)，其為反應(yīng)副產(chǎn)物焦磷酸鎂，此時(shí)表明反應(yīng)劇烈。在下一步 RNA 純化前，可通過短暫離心去除沉淀物，此過程并不丟失 RNA。
3. 通常轉(zhuǎn)錄后 RNA 產(chǎn)物濃度在 2-4 μg/μl，因此電泳時(shí)，僅需取 0.05-0.1 μl 即可。

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