一步法miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

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商品介紹：

描述：由于 miRNAs 分子序列較小，僅 20nt 左右，沒有 真核生物有的 Poly(A)尾巴結(jié)構(gòu)，采用傳統(tǒng) Oligo dT 引 物和隨機引物很難獲得從 miRNA 到 cDNA 的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn) 物。 公司開發(fā)出一套全新的加 A 法 miRNA 反轉(zhuǎn) 錄試劑盒，基于 Peter 改良的 miR-Q 技術(shù)， 可以對成熟的 miRNA 同時完成加 A 反應(yīng)和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)， 直接獲得含有特異性 tag 和 15(T)的 cDNA 產(chǎn)物（如圖 1 所示）。該方法使得 miRNA 反轉(zhuǎn)錄與 mRNA 的反轉(zhuǎn)錄一 樣輕松。直接將提取的 miRNA 與反應(yīng)緩沖液混合物混合， 并置于 PCR 儀上 1 小時即可獲得高濃度的、包含所有 miRNAs 分子的 cDNA 產(chǎn)物。獲得的 cDNA 產(chǎn)物適用于 HG miRNA 熒光定量 PCR 試劑盒進行定量檢測，該方法 已被大量文獻所采用。 

儲存：請置于-20°C，可保存 2 年；避免反復(fù)凍融
操作方法
1. 按以下組分配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液
miRNA（0.01-0.1 μg）or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*特別說明： 10×miRNA RT Primer 引物為
5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’，定量擴增
用特異性上下游引物進行擴增，圖 2 是以 hsa-miR-21 為
實例說明特異性上下游引物的設(shè)計方法
2. 在 PCR 儀上按以下條件進行反應(yīng):
 37°C 60min
 95°C 5min
3. 獲得 cDNA 產(chǎn)物后使用 HG miRNA 熒光定量 PCR 試劑盒進行 miRNA 定量檢測。

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