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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠卵巢成纖維細(xì)胞說明
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠卵巢成纖維細(xì)胞【Mouse Ovary: Normal Ovarian Firbroblasts】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠卵巢成纖維細(xì)胞說明 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963827 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
Ratcholesterol,CHELISA試劑盒大鼠膽(CH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硫酸天仙子胺水合物 HPLC≥98% 20mg
Ratcholesterolesteransferprotein,CETP大鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 牛蒡子苷元'Oβ龍膽二糖苷 HPLC≥98% 20mg
Ratcholesterolesteransferprotein,CETP大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 羅漢松樹脂酚'Oβ龍膽二糖苷 HPLC≥98% 20mg
Ratcholesterolesteransferprotein,CETPELISA試劑盒大鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T O蘆薈新甙A HPLC≥98% 20mg
Ratcholesterolesteransferprotein,CETPELISA試劑盒大鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 蘆薈新甙D HPLC≥98% 20mg
RatChorionicGonadoophin,CG大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 苦玄參苷IV HPLC≥98% 20mg
RatChorionicGonadoophin,CGELISA試劑盒大鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 刺苞菊甙 HPLC≥98% 20mg
RatChorionicGonadoophinβ,β-CG大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 瓜子金皂苷XXXI HPLC≥98% 20mg
RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISA試劑盒大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 焦地黃苯乙醇甙B HPLC≥98% 20mg
RatCiatesyhase,CS大鼠檸檬酸合酶(CS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 苦玄參苷X HPLC≥98% 20mg
小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 鹽酸布比卡因 Bupivacaine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>95%,USP
Rat maix metalloproteinase 1 (MMP-1) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒 鹽酸布比卡因(標(biāo)準(zhǔn)品) Bupivacaine HCl 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品,用于含量測(cè)定
HumanGuaninenucleotidedissociationInhibitor,GDIELISAKit 人鳥苷酸解離抑制因子(GDI)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 鹽酸布替萘芬 Butenafine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,JP16
Duckcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISA試劑盒鴨環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 卡托普利 Captopril 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
載玻片細(xì)胞組蛋白H3-K4化熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒(針對(duì)一)10/20 卡托普利(標(biāo)準(zhǔn)品) Captopril 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
MouseD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISAKit小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 卡比多巴 (S)-Carbidopa 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng),一水合物
小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒 ,英文名: AQP-3 ELISA Kit 卡比多巴(標(biāo)準(zhǔn)品) (S)-Carbidopa 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 96T/48T 醋酸氯地孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Chlormadinone Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人庚型肝炎病毒抗體(IgM)試劑盒 Human Hepatitis G virus aibody IgM ELISA Kit 醋酸氯地孕酮 Chlormadinone Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>98%
Ratgonadoopin-releasinghormone,GHELISAKit大鼠促性腺激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸環(huán)丙沙星 Ciprofloxacin HCL 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP34,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠卵巢成纖維細(xì)胞說明大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA檢測(cè)試劑盒RatE-SelectinELISAkit 96T/48T 牛磺鵝去氧膽酸 HPLC≥98% 20mg
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA檢測(cè)試劑盒RatFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 96T/48T 牛磺膽酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Taurocholic acid Salt 質(zhì)量規(guī)格:TLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)ELISA檢測(cè)試劑盒RatFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit 96T/48T 牛磺膽酸鈉 HPLC≥97% 20mg
大鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測(cè)試劑盒RatL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit 96T/48T 牛磺膽酸鈉 Taurocholic acid Salt 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
大鼠N端前腦素(-proBNP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKIT 96T/48T 牛磺膽酸-3-硫酸酯二鈉鹽 Taurocholate-3-sulfate,di salt 質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測(cè)試劑盒RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 96T/48T 牛防風(fēng)素;6-甲氧基當(dāng)歸素 Sphondin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%
大鼠N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 96T/48T 牛扁堿 HPLC≥98% 20mg
大鼠p16基因化檢測(cè)試劑盒20 牛蒡子苷元'Oβ龍膽二糖苷 HPLC≥98% 20mg
大鼠PDGFβ基因化檢測(cè)試劑盒20 牛蒡子苷元-4'-O-β-龍膽二糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Arctigenin 4'-O-β-gentiobioside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠PGES基因化檢測(cè)試劑盒20 牛蒡子苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Arctiin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
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