當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養>>原代細胞>> T25m2人肺大靜脈內皮細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。
產品名稱 | 人肺大靜脈內皮細胞操作 |
規格 | T25m2 |
貨號 | CS-963712 |
人肺大靜脈內皮細胞【Human Lung: Pulmonary Vein Endothelial Cells】產品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,用于培養該細胞的組織采集是根據國際標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質量的穩定。在生物技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
雞可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA檢測試劑盒ChickenSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1 96T/48T 氯化金 Gold (III) chloride tetrahydrate 質量規格:BC
雞可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA檢測試劑盒ChickensolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCR 96T/48T 石墨粉(>99%,BR) Graphite powder 質量規格:>99%,BR
雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)ELISA檢測試劑盒ChickenJapaneseEncephalitisIgG,JEIgG 96T/48T 己二醇(>98%,BR) Hexylene glycol 質量規格:>98%,BR
雞硫酸類肝素(HS)ELISA檢測試劑盒Chickenheparansulfate,HS 96T/48T 六甲基磷酰三胺(>98%,BR) HMPA, hexamethylphosphoramide 質量規格:>98%,BR
雞酶(CA)ELISA檢測試劑盒Chickencarbonicanhydrase,CA 96T/48T 還原茚三酮二水合物(>98%,BR) Hydrindantin hydrate 質量規格:>98%,BR
雞核糖核酸(Irna)ELISA檢測試劑盒ChickenImmuneRNA,Irna 96T/48T 中粘度羥丙基纖維素 Hydroxypropyl cellulose 質量規格:4000~6500 mpa.s,BR
雞球蛋白G(IgG)ELISA檢測試劑盒ChickenImmunoglobulinG,IgG 96T/48T 3-吲哚基-beta-D-吡喃半乳糖苷(>98%(TLC),BR) Indoxyl-Gal 質量規格:>98%(TLC),BR
雞熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein20,HSP-20 96T/48T 3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環已胺鹽(>98%(HPLC),BR) Indoxyl-Glucuronide 質量規格:>98%(HPLC),BR
雞熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein40,HSP-40 96T/48T 代苯(>98%,醫藥級) Iodobenzene 質量規格:>98%,醫藥級
雞熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA檢測試劑盒ChickenHeatShockProtein60,HSP-60 96T/48T 硫化鐵 (II)(>70%,BR) Iron (II) sulfide 質量規格:>70%,BR
小鼠活化素A(Activin-A)ELISA檢測試劑盒MouseActivinAELISAKit 96T/48T 苦瓜皂苷 C HPLC≥95% 20mg
人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)試劑盒 Human ai-fibrillarin aibody,AFA/snoRNP/U3RNP ELISA Kit (E)阿魏酸乙酯 HPLC≥98% 20mg
RatdipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒規格:96T/48T 香葉基,,','四羥基黃酮 HPLC≥95% 20mg
4%多聚甲固著液50毫升 香葉基,,','四羥基黃酮 HPLC≥95% 20mg
Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISA試劑盒小鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規格:96T/48T 高黃綠酸 HPLC≥95% 20mg
小鼠無翅型MMTV整合位點家族成員5A(W5A)ELISA試劑盒 ,英文名: W5A ELISA Kit 桑辛素 T HPLC≥95% 20mg
兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA檢測試劑盒Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISAKit 96T/48T 桑辛素 M HPLC≥95% 20mg
牛心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 Bovine cardiac oponin I,cTn-I ELISA kit beta鼠李素 HPLC≥95% 20mg
英文名稱HumanainuclearaibodyELISAKIT人抗核抗體(ANA)規格:96T/48T 羥基彌羅松酚 HPLC≥95% 20mg
地生蘭(terresial)移植維護培養基500毫升溶液/片劑 荷包牡丹堿 HPLC≥95% 20mg
人肺大靜脈內皮細胞操作RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit大鼠凋亡相關因子配體(FASL)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石蕊 Litmus 質量規格:AR
RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA試劑盒大鼠凋亡相關因子配體(FASL)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石蕊 Litmus 質量規格:AR
RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISAKit大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石墨粉(>99%,BR) Graphite powder 質量規格:>99%,BR
RatFattyacyl-CoAsyhetase,ACSELISA試劑盒大鼠脂酰輔酶A合成酶(ACS)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石榴皮鞣素(標準品) Punicalin 質量規格:HPLC≥98%,標準品
RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKiatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISAKit大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石榴皮鞣素 HPLC≥98% 10mg
RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA試劑盒RatFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA試劑盒大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石蠟油 Paraffin oil, light fraction 質量規格:分子生物學級,PCR Grade
Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石斛堿(標準品) Dendrobine 質量規格:HPLC≥97%,標準品
Ratferritin,FEELISA試劑盒大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石斛堿 HPLC≥98% 20mg
RatFibrinogen,FbgELISAKit大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石斛酚(標準品) dendrophenol 質量規格:鑒別
RatFibrinogen,FbgELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒規格:96T/48T 石斛酚 HPLC≥95% 20mg
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