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小鼠腎足突基底膜組織提取物操作

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具體成交價以合同協議為準

產品型號T25m2

品       牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-06-22 09:25:05瀏覽次數:202次

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小鼠腎足突基底膜組織提取物操作如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 

細胞處理:
1 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

產品名稱

規格

貨號

小鼠腎足突基底膜組織提取物操作

T25m2

CS-964300

小鼠腎足突基底膜組織提取物【Kidney: Normal Mouse Kidney Foot Process Basement Membrane Derivatives】腎足突基底膜是腎小球過濾膜的一部分,組成濾膜的中層。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠腎足突基底膜組織中高質量的總RNAPCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mgRNA68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF-80度保存。

潛在的應用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞處理方法:
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據到貨時細胞密度,細胞生長狀態等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。
嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。
PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養瓶,37,5%CO2  培養。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。
4. 將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養瓶和新鮮培養基,37,5%CO2  培養細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640GIBCO,貨號21875-091)90%;優質胎牛血清,10%
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 溫度:37,培養箱濕度為70%-80%
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1213的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
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PAK3 Others Human  PAK3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 奧昔布寧N氧化物Oxybutynin N-Oxide質量規格:美國進口

中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-I(R)-N-去乙基奧昔布寧鹽酸鹽(R)-N-Desethyl Oxybutynin 質量規格:美國進口

SMC-1細胞,胸膜細胞瘤 早幼粒急性白血病細胞系,HL-60細胞 小鼠子細胞;U14α-去環己基-α-苯基奧昔布寧α-Descyclohexyl-α-phenyl Oxybutynin質量規格:美國進口

小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP(S)-N-去乙基鹽酸奧昔布寧(S)-N-Desethyl Oxybutynin 質量規格:美國進口
小鼠腎足突基底膜組織提取物操作胰腺上皮細胞*培養基 100mL1--1,2,4-三唑質量規格:>98%1-METHYL-1,2,4-TRIAZOLE

HEF細胞,胚纖維細胞系 奇異變形桿菌 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA甲啶鉑,吡鉑質量規格:>99%,BRPicoplatin

CXCL12 Protein Mouse 重組小鼠 CXCL12 / SDF-1 蛋白4-硝基芐瞇鹽酸鹽質量規格:>97%4-NitrobenziMidaMide HCl

Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 367-606) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) ,尿素質量規格:ARUrea

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2款冬酮(標準品)質量規格:供含量測定用Tussilago farfara, ext.
我公司提供原代細胞、細胞系、細胞株和菌種,細胞庫管理規范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養條件。純度可達 90%以上,且不含有 HIV-1 HBV HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

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