免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
VMA21 aibody11 kDa Q3ZAQ7Human, Mouse, Rat

VMAT2 aibody56 kDa, observed 56 kDa, 66 kDa Q05940Human

VMO1 aibody22 kDa Q7Z5L0Human, Mouse, Rat

VN1R4 aibody34 kDa, observed 34 kDa, 46 kDa Q7Z5H5Human, Mouse

VNN1 aibody55-70 kDa O95497Human, Mouse

VNN2 aibody33 kDa O95498Human

Vpr aibody11 kDa P05928Human immunodeficiency virus 1

內(nèi)皮細(xì)胞MMRN1蛋白抗體別 名 ECM; astin microfibril ierface located protein 4; astin microfibril ierfacer 4; EMILIN 4; EMILIN4; Endothial cl multimerin 1; Glycoprotein Ia; GlycoproteinIa; GPIa; MMRN 1; MMRN; Multimerin 1; Multimerin-1; Multimerin1; MMRN1_HUMAN.

肌球蛋白重鏈7抗體別 名 Slow Sketal Myosin Heavy chain; adult 1; cardiac muscle beta isoform; cmlc1; MYL 3; sketal muscle; MLC; MYH1; MYH1_HUMAN; MYH7; MYH7_HUMAN; MyHC-2x; MyHC-beta; MyHC-IIx/d; MyHC-slow; Myosin heavy chain 1; Myosin heavy chain 2x; Myosin heavy chain 7; Myosin heavy chain; Myosin heavy chain IIx/d; Myosin heavy chain slow isoform; Myosin-1; Myosin-7.

肌間蛋白1抗體別 名 190 kDa connectin-associated protein; 190 kDa titin-associated protein; EH myomesin; MGC134946; MGC134947; MYOM1; MYOM1_HUMAN; Myomesin 1 185kDa; Myomesin family member 1; Myomesin-1; Skemin.
CD34抗體Gracilibacillus│kekensis分離基物: 其他/岸邊泥沙與水的混合物提供形式: 凍干物模式株: no細(xì)培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Rhizopus│sp.提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Paecilomyces│variotii提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no電工學(xué)會(huì)規(guī)定試驗(yàn)用培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Streptococcus agalactiae Lehmann and Neumann提供形式: freeze-dried安全等級: 2模式株: noMedia testing<br>Corol strain for Streptococcus Group B培養(yǎng)基: Medium 44: Brain Heart Infusion Agar/Broth ATCC® Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep blood生長條件: Temperature: 37°C<br>Atmosphere: Aerobic

Pleurotus│cornucopiae (Paulet) Rolland分離基物: 子實(shí)體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 20～23定期移植法

Diaporthe│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法

Psychrobacter│sp.分離基物: 沉積物/深灰色帶綠色沉積物提供形式: 凍干物模式株: no極地細(xì)培養(yǎng)基: 821生長條件: 15℃液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃真空冷凍干燥法

Bacillus│subtilis subsp. subtilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no苧麻脫膠(好氧脫膠法)培養(yǎng)基: 0002生長條件: 40℃液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法