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產地	進口	加工定制	否
適用領域	科研

真菌 RNAout50 次說明書的詳細介紹：

DNA提取流程圖：
?公司真菌 RNAout50 次說明書的RNA/DNA提取目錄有下面10個系列，5000余種產品：點擊了解更RNA純化。
1、RNA純化系列產品
2、DNA純化系列產品
3、電泳及回收系列產品
4、探針標記及檢測系列產品
5、核酸擴增系列產品
6、克隆表達系列產品
7、基因組研究系列產品
8、蛋白質研究系列產品
9、細胞生物學研究系列產品
10、即用型溶液、質粒庫、菌種庫等等
實驗步驟：
(1)真菌 RNAout50 次說明書實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
問：常用的DNA 濃度及純度檢測方法有哪些？
真菌 RNAout50 次說明書稱答：回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對比定量的Marker 來定量濃度；紫外分光檢測OD260/280 比值，OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好，如果洗脫時不使用溶液Eluent而使用去離子水，比值會偏低，因為pH 值和離子存在會影響光吸收值，但不表示純度低。
問：長片段回收時應注意哪些問題？
答：真菌 RNAout50 次說明書當DNA 段長度較長（5 kb 以上）時，回收效率會有所下降，這是DNA 切膠回收時的常見現象。此時建議按以下方法解決問題：
  1 適當增加待回收DNA 樣品的點樣量；
  2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來，建議洗脫兩次，可以提高洗脫效率；
  3 減少操作過程中對長段DNA 的物理損傷，如混合振蕩操作不要過于劇烈，切膠時不要將DNA 長時間暴露在紫外等下。
注意事項：
● 真菌 RNAout50 次說明書溶液PE *次使用前請按瓶上標簽加入4 倍體積的無水乙醇，即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇，20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇，使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產品對電泳使用的Agarose 種類沒有嚴格限制，可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質量和DNA 回收效率，希望使用高純度的Agarose ，但沒有必要一定要使用低熔點的Agarose 等。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液，以免影響電泳及回收效果。
● 請適當延長電泳時間，在條帶分離清晰后進行切膠回收，以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率，切膠時應盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強。但如果DNA 濃度小，或DNA 初始量少，回收率將會偏低。
● 溶液Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應等，不會影響后續試驗。
● 為了保證回收效率，請不要使用未調整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
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