L-蘋果酸(L-MA)試劑盒使用說明書

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中 L-蘋果酸(L-MA)水平。用純化的   L-蘋果酸

(L-MA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 L-蘋果酸(L-MA)，

再與 HRP 標記的 L-蘋果酸(L-MA)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗

滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終

的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物 L-蘋果酸(L-MA)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下

測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中 L-蘋果酸(L-MA)濃度。

2.      加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.      溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.      配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6.      加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.      溫育：操作同 3。

8.      洗滌：操作同 5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10.    終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.    測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。  測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，