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選擇合適二抗需考慮方面

時(shí)間:2022/12/12閱讀:354
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二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體,上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以廣泛應(yīng)用,如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對(duì)某一特定物種的所有抗體均具有特異性,因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記,大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用;此外,一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子,從而使信號(hào)大大增強(qiáng),提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。

二抗,廣義上是指專門和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測(cè)方案的要求,一般來說,選擇合適的二抗需要從以下幾個(gè)方面考慮:

1.一抗的種屬來源

根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。例如:一抗是小鼠源的單克抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。

2.一抗的類別亞型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會(huì)在產(chǎn)品說明書中有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型(IgG1IgG2aIgG2bIgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞型的二抗。此種抗體在雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其合適。

3.二抗的藕聯(lián)標(biāo)記

一般來講,藕聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP)、熒光基團(tuán)、生物su、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。WBELISA常用的二抗是酶標(biāo)二抗,而免疫熒光實(shí)驗(yàn)中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗,而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。


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