雞ELISA試劑盒載體的外形主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器,不介入化學(xué)反應(yīng)。板式及珠式ELISA的標(biāo)本量一般為100-200ul,而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積,標(biāo)本反應(yīng)量的增加有助于試驗(yàn)敏感性的進(jìn)步。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操縱的尺度化極為有利。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附機(jī)能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附機(jī)能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空缺值較大。1、競(jìng)爭(zhēng)ELISA:此法主要用于測(cè)定小分子抗原及半抗原,其原理類(lèi)似于放射免疫測(cè)定。
其基本程序?yàn)椋?br>① 抗體包被 → 4℃過(guò)夜,洗滌三次、拋干
② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原(對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液
用雞ELISA試劑盒檢測(cè)儀測(cè)定OD值。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi),再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保存其免疫學(xué)活性,又保存酶的活性。專(zhuān)業(yè)技術(shù)員給大家提供ELISA相關(guān)文章。
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