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目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯待塑料對蛋白質的吸附作用是普遍性的。因此在雞ELISA試劑盒測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。在標本和結合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯（吐溫，Tween）一類物質即右達到此目的。使用前應觀察是否變質。蒸餾水的質量在ELISA試劑盒中也至關重要，使用新鮮重蒸餾的。不合格的蒸餾水可使空白值升高。
測定的實施中，應力求各個步驟操作的標準化，下面以板式ELISA試劑盒為例。
雞ELISA試劑盒介紹有關注意事項
1. 用方陣法滴定選擇各反應物zui適工作濃度；
2. 將100μlRAMIG溶液包被聚苯乙烯反應板微孔，4℃濕盒，12h；
3. 棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，甩干；
4. 加入100μl抗激素Mab溶液，37℃70min；
5. 棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，甩干；
6. 各孔內依次加入50μl待測樣液，每個樣品3次重復，15～20℃，20min；
7. 加入50μlHRP標記激素，37℃，60min；
8. 棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，甩干；
其結果可用目測或用分光光度計定量測定，雞ELISA試劑盒本法用不同種抗原包被固相載體后，只要用一種酶標記抗人球蛋白，即可作多種人的傳染病、寄生蟲病以及其他疾病的血清學診斷。如用酶標記抗人IgM,則可用于早期診斷。
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