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貨號 | FS-X10118 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:抗酸染色液(Kinyoun冷染法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml|3×100ml
貨號:FS-X10118
產(chǎn)品介紹:
用途: 抗酸菌(結(jié)核桿菌等)染色,可鑒別抗酸菌與非抗酸菌 注意事項: 抗酸菌染色中l(wèi)eagene公司推薦采用該染色液。經(jīng)典抗酸菌染色法,結(jié)果為:抗酸桿菌/結(jié)核桿菌呈紅色,非抗酸桿菌和背景呈藍(lán)色。主要由復(fù)紅液、脫色液組成。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
金黃亞種酪蛋白激受體A10抗體Human LCP1 (Plastin-2) 人5羥二十碳四烯(5-HETE)免疫試劑盒
腸膜明串珠菌腸道病71型/手足口病病抗體Human LIG1 (DNA ligase 1) 人5核(5-NT)免疫試劑盒
假單胞菌轉(zhuǎn)錄因子ELF1抗體Human LCP2 (Lymphocyte cytosolic protein 2) 人5'-AMP活化蛋白激α-2催化亞基(PRKAA2)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌酪蛋白激B3抗體Human SEMG2(Semenogelin-2) 人Ⅳ型前膠原基末端肽(PⅣNP)免疫試劑盒
鴨疫里氏桿菌磷化酪蛋白激受體B1+B2抗體Human POMC(Pro-opiomelanocortin) 人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒
農(nóng)球菌酪蛋白激受體B1+B2+B3+B4抗體Human LYRM1 (LYR motif-containing protein 1) 人4-羥基壬烯(HNE)免疫試劑盒
溶桿菌空通氣孔樣蛋白2抗體Human KMO(Kynurenine 3-monooxygenase) 人40S核糖體蛋白S19(RPS19)免疫試劑盒
微白黃鏈霉菌同源盒蛋白轉(zhuǎn)錄因子EN2抗體Human LMCD1 (LIM and cysteine-rich domains protein 1) 人Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)免疫試劑盒
糞腸球菌磷化外信號調(diào)節(jié)激5抗體Human LRRK1 (Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 1) 人Ⅲ型前膠原基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒
平菇CD39樣蛋白1抗體Human LCT (Lactase-phlorizin hydrolase) 人Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒
鏈霉菌真核翻譯起始因子5抗體Human LRGUK (Leucine-rich repeat and guanylate kinase domain-containing protein) 人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)免疫試劑盒
大麗輪枝霉早期B淋巴因子2抗體Human LACE1 (Lactation elevated protein 1) 人Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒
魯氏接合酵母ELAVL2蛋白抗體Human TFCP2(Alpha-globin transcription factor CP2) 人Ⅲ型膠原蛋白(COL Ⅲ)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌ELAVL2+ELAVL4蛋白抗體Human IPP (Actin-binding protein IPP) 人Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒
白鮑魚菇同源盒蛋白轉(zhuǎn)錄因子EN1抗體Human LBX1 (Transcription factor LBX1) 人3氧代5α類固4脫氫2(SRD5A2)免疫試劑盒
曲霉轉(zhuǎn)錄因子ER81蛋白抗體Human PTN(Pleiotrophin) 人3型1-磷鞘受體(S1P3)免疫試劑盒
: ATCC10231資源名稱: 白色假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品琥珀
: FRI2008042資源名稱: 嗜蟲沙菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品三油甘油酯
泡囊側(cè)耳Pleurotus│cystidiosus 質(zhì)量規(guī)格:≥98.0%(HPLC),分析標(biāo)準(zhǔn)品乙酰楊
抗酸染色液(Kinyoun冷染法)pHY300PLK 2-(5-溴吡啶-2-基)2-甲基羧酯
Enterobacter cowanii 4-溴-2,5-二氟乙酰酯
大豆慢生根瘤 環(huán)己烷頻那酯神經(jīng)酰合
釀酒酵母 3,5-二氟-4-甲酰基苯基鞘氨激
白蘑 3-[[5-甲基-2-(1-甲基乙基)環(huán)己基]氧]-1,2-β-羥基丁
大腸埃希 2-異氧基-5-溴吡啶幾丁質(zhì)8受體激
缺陷短波單胞 7-氨基-4-羥基-2-萘磺麥豆球蛋白
沙雷氏 2-苯頻那酯高分子量清蛋白
銀耳、白木耳(可訂購) 4-(芐氧基)苯-1-磺酰麥溶蛋白
產(chǎn)氣腸桿 4,7-二喹啉羥基自由基
小串鏈霉 6--5-硝基喹啉檸檬
破傷風(fēng)試驗 2-溴-5-三氟甲基芐鎂原卟啉Ⅸ
釀酒酵母 (S)-N-芐氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-5-氨基乙酰
印度農(nóng)霉 5-疏基-1-苯基-四氮唑唾液
塔賓曲霉 TFA-aa-U醌氧化還原4
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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