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| 貨號 | FS-X9830 |
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中文名稱：即用型DAPI染色液
英文名稱：
產品規(guī)格：10ml|50ml
貨號：FS-X9830
產品介紹:
DAPI（4,6-Diamidino-2-phenylindole ，4,6-二氨基-2-苯基吲哚）是一種DNA 特異性染料，與DNA產生非嵌入式結合，發(fā)出藍色熒光。該染料對細胞膜有半通透性，可透過正常活細胞產生較弱的藍色熒光（細胞固定后熒光增強），而凋亡細胞的膜通透性增加，對其攝取能力增強，產生很強藍光染色。 正常細胞的核形態(tài)呈圓形，邊緣清晰，染色均勻，而凋亡細胞的細胞核邊緣不規(guī)則，細胞核染色體濃集，著色較重，并伴有細胞核固縮，核小體碎片增加，因此從熒光強度及核形態(tài)均可鑒別出細胞發(fā)生凋亡的典型特征。 操作方法（本方法針對貼壁細胞，但不僅限于貼壁細胞） 1. 貼壁培養(yǎng)的細胞爬片棄去培養(yǎng)基，10mM PBS，pH7.4，洗一次； 2. 再滴加入100μL 的DAPI 染液，室溫避光染色5-15 min； 3. 棄去染色液，PBS 漂洗一次， 4. 滴加甘油或Buffer A，熒光顯微鏡以340/380nm 紫外光激發(fā)，500×（40×12.5）（好是100×油鏡頭）觀察、拍照。 儲存：2-8℃，避光，有效期6個月。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
AV-951英文名： Adenosine磷化鈣調磷B亞基B1抗體包裝5g
BGJ398(NVP-BGJ398)英文名： Adiphenine HCl羊毛甾14α-去基化蛋白抗體包裝5g
Carmustine(進分)英文名： Adiphenine HCl補體C5抗體包裝1g
CEP-18770英文名： Alarelin Acetate5號染色體開放閱讀框24抗體包裝250mg
HSP990英文名： Alendronate Sodium5號染色體開放閱讀框42抗體包裝250mg
MK4827 (Niraparib)英文名： Alendronate Sodium5號染色體開放閱讀框49抗體包裝250mg
O-6-芐基鳥英文名： Allopurinol5號染色體開放閱讀框35抗體包裝1g
Ruxolitinib(INCB018424) pho...英文名： Allopurinol中心體蛋白192抗體包裝25g
SB431542,SB-431542英文名： Allylestrenol中心體蛋白27抗體包裝5g
TAE684英文名： Allylestrenol中心體蛋白290抗體包裝100g
Tamoxifen Citrate英文名： Alprostadil,PGE1,中心體蛋白63抗體包裝25g
Tariquidar,XR-9576英文名： Altrenogest中心體蛋白70/p10結合蛋白抗體包裝5g
阿法替尼英文名： Altrenogest中心體蛋白72抗體包裝1ml
阿法替尼雙馬來鹽英文名： Amantadine HCl中心體蛋白95抗體包裝25g
阿西替尼英文名： Amantadine HCl中心體蛋白89抗體包裝1g
: AS2.606資源名稱: 橢圓釀酒酵母 質量規(guī)格：>98%,BR,三合物胰高血糖樣肽1試劑盒異綠原C;Isochlorogenic
豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品,三合物胰高血糖試劑盒異綠原B;Isochlorogenic
拉曼小毛霉原變種Micromucor│ramarnianus 質量規(guī)格：效價≥750IU/MG,BP,BR胰多肽試劑盒異綠原A;Isochlorogenic
即用型DAPI染色液楊奇青霉 1-苯基正癸烷血管生成樣蛋白8
沙諾氏芽孢桿 3-溴甲酯谷脫羧65抗體
幼角鐮孢 4-鄰苯二甲酰亞氨基環(huán)己酮谷脫羧65IgG抗體
黑色附球霉 3,5-二溴-4-硝基吡唑新型隱球抗原
大腸埃希 薄荷酮, mixture of isomers血管內皮生長因子D
雅致枝霉 2-溴-3-氟三氟甲苯沙眼衣原體IgA抗體
谷棒桿 (S)-3-氨基四對甲苯磺鹽枸櫞
季也蒙邁耶氏酵母 2-氨基-2，4-二煙甲酯磷二酯9A
大孔 (R)-(+)-alpha-氨基-gamma-丁內酯鹽鹽耐膽鹽
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 普羅帕脒整合αMβ2
黃色糖多孢 N-芐基-雙鄰乙基氨基鹽鹽整合αVβ5
居真細屬 洛韋微管相關蛋白輕鏈3II
少根根霉 3,5-二氟-4-甲氧基苯甲甲型肝炎抗原
纖維單胞 帕韋三水合物腫瘤蛋白p53
金黃桿 阿替美唑鹽鹽氧化低密度脂蛋白IgG抗體
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