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貨號	FS-X9828

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Hoechst 33342染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：10ml|50ml

貨號：FS-X9828

產(chǎn)品介紹:

熒光染料Hoechst 33342 具有一定的細胞膜透性，能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色。Hoechst33342 可以用來復染細胞的細胞核。

對于非固定的活細胞來說，hoechst33342 可以起到區(qū)別凋亡和正常細胞的作用，因為凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入細胞中的Hoechst 33342 比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA 對于細胞的稱染來說，可以配以適當?shù)?.1% Triton X-100 通透，從而是所有細胞細胞核有效的染上hoechst 染料。

儲存：4℃，避光，有效期6個月。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

8-羥基脫氧鳥(8-OHdG)英文名：8-OHdG 1號染色體開放閱讀框194抗體包裝1g

70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)英文名：HSPA8 1號染色體開放閱讀框198抗體包裝25g

70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)英文名：HSPA5 1號染色體開放閱讀框21抗體包裝5g

70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)英文名：HSPA1A 1號染色體開放閱讀框216抗體包裝1g

60kD熱休克蛋白(HSPD1)英文名：HSPD1 1號染色體開放閱讀框43抗體包裝25g

5羥色胺轉運蛋白(SERT)英文名：SERT 1號染色體開放閱讀框50抗體包裝5g

5-羥色胺(5-HT)英文名：5-HT 1號染色體開放閱讀框49抗體包裝1g

5-羥基乙(5-HIAA)英文名：5-HIAA 1號染色體開放閱讀框53抗體包裝5g

50kDa核孔蛋白(NUP50)英文名：NUP50 1號染色體開放閱讀框54抗體包裝1ml

27kDa熱休克蛋白(HSPB1)英文名：HSPB1 1號染色體開放閱讀框55抗體包裝5g

25-羥基維生D3(HVD3)英文名：HVD3 1號染色體開放閱讀框56抗體包裝100g

25kDa突觸關聯(lián)蛋白(SNAP25)英文名：SNAP25 1號染色體開放閱讀框65抗體包裝25g

210kDa核孔蛋白(NUP210)英文名：NUP210 1號染色體開放閱讀框64抗體包裝100g

20S-蛋白體(20S-PSM)英文名：20S-PSM 1號染色體開放閱讀框69抗體包裝25g

2',5'-寡腺合成1(OAS1)英文名：OAS1 1號染色體開放閱讀框77抗體包裝500g

馬氏副球菌Paracoccus│marcusii 質量規(guī)格：>99%,BR,三合物胰脂肪試劑盒異槲皮;Isoquercitrin

海假交替單胞菌Pseudoalteromonas│marina 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品胰抑制試劑盒異鼠李-3-O-新橙皮;Isorha

結核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質量規(guī)格：>99%,BR胰腺癌標志物CA242 原蘇木B;Protosappanin
Hoechst 33342染色液枯斑擬盤多毛孢 3--4-甲酰苯,95%磷二酯2

硬水黃桿 1-氟吡啶四氟鹽過氧化物

熱纖梭* ,4,6-基吡啶三氟磺鹽RecQ解旋樣蛋白5

肺形側耳 (R)-3-氨基四鹽鹽載脂蛋白A

纖維鏈霉乙二二硫代縮氨基脲脂蛋白A

茄鏈格孢 N-Boc-L-環(huán)己基甘氨表皮調節(jié)

叢毛單胞 1-甲基吲唑-4-羧Derlin1蛋白

戊糖片球 Boc-1-氨基環(huán)烷甲血清運鐵蛋白受體

布魯氏生物Ⅵ型戊鈉原鈣黏1

變紫青霉 2--3-甲基-4-(甲基磺酰)雌酮

尖孢鐮刀胡麻專化型 5-氨基-2-三氟顆粒蛋白前體

梨形毛霉 O,O-二乙基二硫代磷, 一般為谷受體2A

屎腸球庚乙酯生長分化因子7

中慢生華癸根瘤 4,4'-亞甲基-雙(3--2,6-二乙基苯)骨成型蛋白8A

枯草芽孢桿 1-(2-芐氧基-4-氟苯基)乙酮生長分化因子6
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)