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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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細(xì)胞骨架藍(lán)色熒光探針

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產(chǎn)品型號(hào)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-11 15:23:27瀏覽次數(shù):165次

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貨號(hào) FS-X9814
細(xì)胞骨架藍(lán)色熒光探針正在熱銷的產(chǎn)品:FOXJ1/HFH-4 叉頭蛋白J1抗體氧鹽鹽 98%
FoxP1 叉頭蛋白P1抗體甜菜,無(wú)水 98%
FOXM1/HFH 11 叉頭蛋白M1抗體甜菜,一水 99%
FoxP3 叉頭蛋白P3抗體甜菜鹽鹽 ,99.5%
FOXO1 叉頭蛋白O1抗體酰酮鈹 97%
Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32) 化叉頭蛋白家族抗

中文名稱:細(xì)胞骨架藍(lán)色熒光探針

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:200μL

貨號(hào):FS-X9814

產(chǎn)品介紹:

本染料是F-肌動(dòng)蛋白的高親和力探針,由蘑菇毒素制成,與藍(lán)色熒光染料偶聯(lián)。以納米摩爾濃度使用時(shí),鬼筆毒素是方便的探針,可用于對(duì)固定和打孔的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)體系中的F-肌動(dòng)蛋白進(jìn)行標(biāo)記、鑒別和定量。

Ex/Em:350nm/450nm,比抗體染色更*。適合于固定和通透的樣本。

熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽與肌動(dòng)蛋白對(duì)于不同的物種,包括植物和動(dòng)物具有幾乎相同的高結(jié)合屬性。鬼筆環(huán)肽結(jié)合具有高選擇性,而F-肌動(dòng)蛋白紅色熒光。呈現(xiàn)出很少的非特異性染色。本產(chǎn)品可以用于熒光顯微鏡、微孔板、比色皿。

濃度:200U/mL儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期6個(gè)月。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

白介15(IL15)英文名:IL15 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框103抗體包裝100g

白介13受體α2(IL13Rα2)英文名:IL13Rα2 兒茶酚O基移位抗體包裝25g

白介13(IL13)英文名:IL13 補(bǔ)體C1qTNF9鏈多肽抗體包裝5g

白介12B(IL12B)英文名:IL12B 平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體包裝1g

白介12A(IL12A)英文名:IL12A 心肌病相關(guān)蛋白2包裝5g

白介11受體α(IL11Rα)英文名:IL11Rα 5號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框34抗體包裝100g

白介11(IL11)英文名:IL11 E1A激活基因激蛋白1抗體包裝25g

白介10(IL10)英文名:IL10 2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體包裝5g

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)英文名:OCT4 豬瘟病抗體包裝1g

tRNA合成復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)英文名:AIMP1 3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體包裝5g

基己糖Bβ(HEXβ)英文名:HEXβ 2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體包裝5g

基己糖Aα(HEXα)英文名:HEXα 豬瘟病抗體包裝5g

基端前心鈉肽(NT-ProANP)英文名:NT-ProANP 中心體蛋白110抗體包裝1g

基端前腦鈉(NT-ProBNP)英文名:NT-ProBNP 纖維包裝5g

阿黑皮原(POMC)英文名:POMC 分裂周期蛋白14B抗體包裝10ml

假單胞菌Pseudomonas│testosteroni 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M試劑盒鹽葫蘆巴堿;Trigonelline

Staphylococcus│aureus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒鹽石蒜堿;Lycorine hydro

疣孢青霉Penicillium│verruculosum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分,sigma E1383 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒雅姆皂元 ;yamogenin
細(xì)胞骨架藍(lán)色熒光探針銹赤蠟黃鏈霉 1-芐氧羰基-3-羥基氮雜環(huán)丁烷喋呤抗體

慢生根瘤 2,4-二溴吡啶-3-甲胃動(dòng)蛋白2抗體

釀酒酵母 3,4-雙(二氟甲氧基)苯甲Ⅱ型膠原α1

泡盛曲霉 6-溴-7-氟喹啉無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員1

馬沙門氏 1-Boc-2-T因子

白黃馬賽 1-二茂鐵基乙尿肌酐

黃曲霉 2--4-甲氧基苯青霉

芽孢桿 N,N-雙(4-磺丁基)-3-鏈霉

布魯塞爾德克酵母 2-基-4-氟甲酯慶大霉

食有機(jī)物深海芽孢桿 6--1,8-二氮雜萘-2(1H)-酮相關(guān)抗原11A

卡門柏青霉 3-氟-4-溴溴芐肝吸蟲(chóng)

Methylibium 基二茂鐵全反鈷II型

釀酒酵母 H-89 肝吸蟲(chóng)IgM抗體

毛栓孔 1-甲基-1H-吡唑-4-肝吸蟲(chóng)IgG抗體

類芽孢桿屬 1-N-芐氧羰基哌-2-甲甲酯抗磷脂A2受體IgG抗體

 


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