細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：結(jié)腸神經(jīng)元細胞    

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9811

產(chǎn)品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

小鼠β葡糖(β-glucosidase)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse β-glucosidase ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠多巴(DA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse dopamine,DA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠高靈敏度促甲狀腺(U-TSH)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse ultrasensitive thyroid-stimulating hormone,U-TSH ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠高敏甲狀腺(u-T4)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Ultrasensitivity Thyroxine,u-T4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠β葡萄糖醛(βGD)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse β-glucuronidase,βGD ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠脫羧自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse glutamic acid decarboxylase autoantibody,GAD-Ab ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠雌二受體(ER)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Estradiol receptor,ER ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠甲狀旁腺相關蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠苯(LPA)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse L-phenylalanine,LPA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse anti-cardiolipin antibody IgA,ACA-IgA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse anti-cardiolipin antibody IgM,ACA-IgM ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse anti-cardiolipin antibody IgG,ACA-IgG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠apelin 12(AP12)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse apelin 12,AP12 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠α干擾(IFN-α)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Interferon α,IFN-α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠丙激(PK)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse pyruvate kinase,PK ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒英文名稱：Mouse rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠腫瘤標志物(CA724)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse CA724 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
結(jié)腸神經(jīng)元細胞SPNS1  SPNS1抗體規(guī)格: 0.2ml

beta Bax/BCL2 associated X protein  BCL2相關X蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

Nucleolar protein 3/Apoptosis repressor with CARD  核仁蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml

CARD10  BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體規(guī)格: 0.2ml

CARD12  凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體規(guī)格: 0.2ml

CARD14  凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白14抗體規(guī)格: 0.2ml

CARD15  凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體規(guī)格: 0.2ml

CARD4  凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。