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細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 10:31:25瀏覽次數:173次

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貨號 FS-X9548
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檸檬su

中文名稱:細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)

英文名稱:Cell proliferation tracer fluorescence probe

產品規格:5mg

貨號:FS-X9548

本品是一種近年來被廣泛應用的細胞增殖檢測用熒光探針,也可以用于細胞的熒光示蹤。基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結果*一致,但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數,同時如果和其它熒光探針聯用,可以獲取不同分裂次數細胞的其它相關信息。
產品介紹
:


:150347-59-4

分子式:C29H19NO11

分子量:557.47

CFDA SE可以通透細胞膜,進入細胞后可以被細胞內的酯酶(esterase)催化分解成CFSE,CFSE可以偶發性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內蛋白的Lysine殘基或其它氨基發生結合反應,并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時,即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定,穩定標記的時間可達數個月。CFDA SE標記細胞的熒光非常均一,比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一,并且 分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩定,每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半,這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞,分裂一次的細胞(1/2的熒光強度),分離兩次的細胞(1/4的熒光強度),分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數的細胞。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結果參考右圖。每一個峰代表一種分裂次數的細胞,從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數的細胞。分裂次數較多后,分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。

使用CFDA SE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。目前CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測,也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測,甚至還可以用于細菌增殖的檢測。

CFDA SE標記細胞呈綠色熒光,檢測時的激發波長可以選擇488nm,此時的發射波長為518nm,使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標記的細胞也可以用熒光顯微鏡進行觀察。 CFDA SE標記的細胞無論在體外還是體內都不會使鄰近細胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標記后不會從一個細胞轉移到鄰近細胞。CFDA SE標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞,佳標記時間需自行摸索。

CFDA SE可以使用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制,配制濃度通常為2-10mM。配制好的溶液宜當天使用完畢,不宜長時間保存。CFDA SE標記細胞時的終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。在工作濃度為5μM時,一個包裝的本產品共可以標記約1.8升的細胞。

儲存條件:-20℃,有效期6個月。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

突觸融合蛋白2(STX2)檢測試劑盒  forSyntaxin2(STX2)    

巖藻糖基轉移mei8(FUT8)檢測試劑盒  forFucosyltransferase8(FUT8)    

生長抑su(SST)檢測試劑盒  forSomatostatin(SST)    

解整合su金屬蛋白mei9(ADAM9)檢測試劑盒  forADisintegrinAndMetalloprotease9(ADAM9)    

N-jia基-D-天氡氨suan離子能谷氨suan受體1(GRIN1)檢測試劑盒  forGlutamateReceptor,Ionotropic,N-Methyl-D-Aspartate1(GRIN1)    

線粒體乙醛脫氫mei(ALDM)檢測試劑盒  forAldehydeDehydrogenase,Mitochondrial(ALDM)    

細胞周期suY(CCNY)檢測試劑盒  forCyclinY(CCNY)    

AMPA離子能谷氨suan受體3(GRIA3)檢測試劑盒  forGlutamateReceptor,Ionotropic,AMPA3(GRIA3)    

磷脂酰肌chun特異性磷酯meiCβ1(PLCβ1)檢測試劑盒  forPhospholipaseCBeta1,PhosphoinositideSpecific(PLCb1)    

白介su1β(IL1β)檢測試劑盒  forInterleukin1Beta(IL1b)    

凋亡相關因子配體(FASL)檢測試劑盒  forFactorRelatedApoptosisLigand(FASL)    

jia狀旁腺激su(PTH)檢測試劑盒  forParathyroidHormone(PTH)    

激肽釋放mei3(KLK3)檢測試劑盒  forKallikrein3(KLK3)    

淋巴細胞抗原96(LY96)檢測試劑盒  forLymphocyteAntigen96(LY96)    

蛋白mei體亞基α1(PSMα1)檢測試劑盒  forProteasomeSubunitAlphaType1(PSMa1)    

橋粒芯糖蛋白4(DSG4)檢測試劑盒  forDesmoglein4(DSG4)    

血小板因子4V1(PF4V1)檢測試劑盒  forPlateletFactor4Variant1(PF4V1)    
細胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)ben芴chun標準品  規格:100mg  英文名稱:Lumefantrine

環磷酰an相關物質A標準品  規格:25mg  英文名稱:

fu康zuo相關物質B標準品  規格:10mg  英文名稱:

標準品  規格:200mg  英文名稱:Warfarin

三正丁基氧化磷標準品  規格:25mg  英文名稱:Tributyl Phosphine Oxide

卡麥角林標準品  規格:125mg  英文名稱:Cabergoline

suan阿夫zuo嗪標準品  規格:150mg  英文名稱:Alfuzosin Hydrochloride

枸櫞suan鉍標準品  規格:100mg  英文名稱:Bismuth Citrate

番瀉A標準品  規格:20mg  英文名稱:Sennoside A

suan標準品  規格:2g  英文名稱:Cholic Acid (AS)

 


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