細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：大鼠腎小球系膜細胞    

產品英文：HBZY-1

貨號：FS-01X9713

細胞培養條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒英文名稱：Human Helicobacter pylori IgG ，Hp-IgG ELISA Kit規格:96T/48T

人γ谷酰轉移(GGT) ELISA試劑盒英文名稱：Human gamma glutamyl transpeptidase，GGT ELISA Kit規格:96T/48T

人胃粘液(GM)ELISA試劑盒英文名稱：Human Gastric Mucin，GM ELISA Kit規格:96T/48T

人Ⅰ型膠原N末端(NTX)ELISA試劑盒 英文名稱：Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen，NTX ELISA Kit規格:96T/48T

人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Helicobacter pylori IgM，Hp-IgM ELISA Kit規格:96T/48T

人胃抑(GIP)ELISA試劑盒 英文名稱：Human gastric inhibitory polypeptide，GIP ELISA Kit規格:96T/48T

人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Collagen-like Bioprotein Ⅱ，HCBⅡ ELISA Kit規格:96T/48T

人多YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒英文名稱：Human Peptide YY ELISA Kit規格:96T/48T

人促胃液受體(GsaR)ELISA試劑盒英文名稱：Human gastrin receptor，GsaR ELISA Kit規格:96T/48T

人膽囊收縮/縮膽囊八(CCK-8)ELISA試劑盒英文名稱：Human cholecystokinin octapeptide，CCK-8 ELISA Kit規格:96T/48T

人α1性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒英文名稱：Human α1-Acid glycoprotein，α1-AGP ELISA Kit規格:96T/48T

人丙二醛(MDA)ELISA試劑盒英文名稱：Human malondialchehyche，MDA ELISA Kit規格:96T/48T

人膽囊收縮/腸促胰(CCK)ELISA試劑盒英文名稱：Human cholecystokinin，CCK ELISA Kit規格:96T/48T

人Ⅲ型前膠原(PⅢNP)ELISA試劑盒英文名稱：Human N-terminal procollagen Ⅲ propeptide，PⅢNP ELISA Kit規格:96T/48T

人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Collagen Type Ⅱ，Col Ⅱ ELISA Kit規格:96T/48T

人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Collagen Type Ⅰ，Col Ⅰ ELISA Kit 規格:96T/48T

人Ⅰ型前膠原羧基端(PⅠCP)ELISA試劑盒英文名稱：Human procollagen Ⅲ N-terminal peptide，PⅢNT ELISA Kit 規格:96T/48T

人透明質(HA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Hyaluronic acid，HA ELISA Kit規格:96T/48T
大鼠腎小球系膜細胞AF10/MLLT10  髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗體規格: 0.1ml

phospho-BCAR1(Tyr410)  磷化乳腺癌抗雌耐藥蛋白1規格: 0.1ml

CAMK1D  鈣調蛋白激CaMK1D抗體規格: 0.2ml

DDX43/CT13  腫瘤/睪丸抗原13抗體規格: 0.2ml

GIG22/DNAJC15  細胞生長抑制蛋白22抗體（甲基化控制J蛋白）規格: 0.2ml

NRG1/HRG beta 1  乳腺癌細胞分化因子P45抗體 Heregulinβ規格: 0.1ml

ID3  DNA結合抑制因子3抗體規格: 0.2ml

LC3C  微管相關蛋白輕鏈3C抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。