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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>科研細胞>>原代細胞培養(yǎng)>> F12K基礎培養(yǎng)基
| 產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
|---|---|---|---|
| 適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9997 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產品屬于：
產品名稱：F12K基礎培養(yǎng)基
英文名稱：F12K
貨號：FS-01X9997
產品規(guī)格：500ml
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
Interleukin 4 (IL4)白介4(IL4)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 4 (IL4)白介4(IL4)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 4 (IL4)白介4(IL4)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 5 (IL5)白介5(IL5)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 5 (IL5)白介5(IL5)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 6 (IL6)白介6(IL6)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 6 (IL6)白介6(IL6)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 6 (IL6)白介6(IL6)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 8 (IL8)白介8(IL8)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 9 (IL9)白介9(IL9)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 9 (IL9)白介9(IL9)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Laminin Beta 1 (LAMb1)層粘連蛋白β1(LAMβ1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Laminin Beta 1 (LAMb1)層粘連蛋白β1(LAMβ1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Laminin Beta 1 (LAMb1)層粘連蛋白β1(LAMβ1)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Leptin Receptor (LEPR)瘦受體(LEPR)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Leptin Receptor (LEPR)瘦受體(LEPR)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Leptin (LEP)瘦(LEP)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Leptin (LEP)瘦(LEP)檢測試劑盒(聯免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
F12K基礎培養(yǎng)基RNF128 環(huán)指蛋白128抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF130/ 環(huán)指蛋白130抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF133 環(huán)指蛋白133抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF138 環(huán)指蛋白138抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF121 環(huán)指蛋白121抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF113B 環(huán)指蛋白113B抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF150 環(huán)指蛋白150抗體規(guī)格: 0.2ml
RNF165 環(huán)指蛋白165抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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