斗破苍穹续集,欢乐颂第二季,天蚕土豆

貨號(hào)	FS-X10185

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：木栓化細(xì)胞壁染色液(蘇丹染色法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：50ml

貨號(hào)：FS-X10185

產(chǎn)品介紹:

用途：

主要用于新鮮組織切片以及經(jīng)乙醇、FAA固定液固定、冰凍干燥的組織切片等樣本的角質(zhì)化細(xì)胞壁或者栓質(zhì)化細(xì)胞壁的染色觀察，如有，則有橘紅色的顏色反應(yīng)。

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黑曲霉甘肽受體3抗體Human UBE3C 大鼠胰島受體底物1(IRS-1)免疫試劑盒

葡萄座腔菌腦腸肽受體抗體Human UBE4A 大鼠胰島受體β(ISR-β)免疫試劑盒

龜裂鏈霉菌GRC5蛋白抗體Human UBE2G1 大鼠胰島降解(IDE)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌腸和大腦特定同源蛋白1抗體Human UBE2G2 大鼠胰島(INS)免疫試劑盒

金黃殼囊孢生長(zhǎng)分化因子6抗體Human UBE2J2 大鼠原(Try)免疫試劑盒

暗孢毛殼鳥核交換因子GEFT抗體Human IDH2(IsocitRate dehydrogenase [NADP], mitochondrial) 大鼠原激活肽(TAP)免疫試劑盒

白黑鏈霉菌膠漿成熟因子β抗體Human UBE4B 大鼠原-1 免疫試劑盒

灰樹花蛋白偶聯(lián)受體56抗體Human UBE2H 大鼠(trypsin)免疫試劑盒

植物乳桿菌腸和大腦特定同源蛋白2抗體Human UBE2K 大鼠一氧化碳血紅蛋白(HbCO)免疫試劑盒

沼澤紅假單胞菌甘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human UBL3 大鼠一氧化氮合成(NOS)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)激釋放激同源盒蛋白1抗體Human UGCGL2 大鼠一氧化氮(NO)免疫試劑盒

不動(dòng)桿菌血型糖蛋白δ抗體Human UGDH 大鼠葉(FA)免疫試劑盒

Arthrobacter谷受體1抗體Human UBXN10 大鼠氧還原蛋白過氧化物2(PRDX2)免疫試劑盒

德氏乳桿菌保加利亞亞種味覺受體蛋白家族10亞基5抗體Human UBE2H 大鼠氧化型(GSSG)免疫試劑盒

黃桿菌磷化谷受體1抗體Human UBE2J2 大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)免疫試劑盒

新城疫病磷化谷受體1抗體Human IDH2(IsocitRate dehydrogenase [NADP], mitochondrial) 大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫試劑盒

少根根霉Rhizopus│arrhizus 質(zhì)量規(guī)格：藥物脫色,200目老鸛草

AS2.1737資源名稱: 橄欖假絲酵母質(zhì)量規(guī)格：培養(yǎng)級(jí)三七皂R2(R型)

產(chǎn)酒石不動(dòng)桿菌Acinetobacter│tartarogenes 質(zhì)量規(guī)格：植物培養(yǎng)級(jí)三七皂Ft1
木栓化細(xì)胞壁染色液(蘇丹染色法)糖化酵母 3-氟-2-酪酪肽

側(cè)耳 2--6-氟甲苯類風(fēng)濕因子

綠色木霉 N-芐氧羰基-DL-蛋類胰蛋白

芽孢桿屬乙基粒集落激因子

硬毛栓孔 O-琥珀酰亞-1,3-二甲基基脲六氟磷鹽粒巨噬集落激因子

拜氏色鹽桿 2-氨基-4,5-二氟裂解型糖基化終末產(chǎn)物受體

多根硬皮馬勃 1-芐基高哌α

釀酒酵母 N-甲基亞氨二乙功能相關(guān)抗原1

平菇 1-二乙基-2-磷二酯

芽枝狀枝孢 2-(4-乙氧基苯基)-2-甲基磷二酯3B

小馬勃雙(2,4,4-基戊基)膦磷甘油激

溶藻弧 3-乙酰基-7氮雜磷果糖激1

蟬花* 6-叔丁基-4--噻吩[2,3-D]嘧啶磷化AKT蛋白

哈茨木霉 2,4,6-三羥基磷化p38絲裂原活化蛋白激

閃光須霉 4-甲氧基-2,3,5,6-四氟苯甲磷化Tau蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)