細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：頸動脈成纖維細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9788

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

人血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒英文名稱：Human Fibrinogen,Fbg ELISA Kit規格:96T/48T

人主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒英文名稱：Human major histocompatibility complex Ⅰ,MHCⅠ/HLAⅠ ELISA Kit規格:96T/48T

人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit規格:96T/48T

人血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒英文名稱：Human thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit規格:96T/48T

人淋巴細胞功能相關抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒 英文名稱：Human lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 規格:96T/48T

人主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒英文名稱：Human major histocompatibility complex Ⅲ,MHCⅢ/HLA-Ⅲ ELISA Kit規格:96T/48T

人主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒英文名稱：Human major histocompatibility complex Ⅱ,MHCⅡ/HLA-Ⅱ ELISA Kit規格:96T/48T

人β血小板球蛋白/β血栓環蛋白(β-TG)ELISA試劑盒英文名稱：Human β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit規格:96T/48T

人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒英文名稱：Human Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit規格:96T/48T

人淋巴細胞功能相關抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒英文名稱：Human lymphocyte function associated antigen 2,LFA-2 ELISA Kit規格:96T/48T

人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒英文名稱：Human Leukemia inhibitory factor,LIF ELISA Kit 規格:96T/48T

人Salusin-α ELISA試劑盒英文名稱：Human Salusin α ELISA Kit規格:96T/48T

人胰島受體底物2(IRS-2)ELISA試劑盒英文名稱：human Insulin receptor substrate 2,IRS-2 ELISA Kit規格:96T/48T

人轉甲狀腺蛋白(TTR)ELISA試劑盒英文名稱：Human transthyretin,TTR ELISA Kit規格:96T/48T

人晚期氧化蛋白產物(AOPP)ELISA試劑盒英文名稱：Human advanced oxidation protein products,AOPP ELISA Kit規格:96T/48T

人胰島淀粉樣多(IAPP)ELISA試劑盒英文名稱：Human islet amyloid polypeptide,IAPP ELISA Kit規格:96T/48T

人甲狀腺結合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒英文名稱：Human Thyroxine-Binding Globulin Assay,TBG ELISA Kit規格:96T/48T

人晚期糖基化終末產物(AGEs)ELISA試劑盒英文名稱：Human advanced glycation end products,AGEs ELISA Kit規格:96T/48T
頸動脈成纖維細胞FMRP/FMR1  脆性X智力低下蛋白抗體規格: 0.2ml

IFRD1  干擾相關發育調節蛋白1抗體（神經生長因子誘導蛋白PC4）規格: 0.2ml

PERP/p53 apoptosis effector related to PMP22  p53凋亡相關作用蛋白PMP22抗體規格: 0.1ml

phospho-GATA-4(ser 262)  磷化GATA結合蛋白4抗體規格: 0.1ml

GPR109A/Puma gamma  G蛋白偶聯受體109A抗體規格: 0.2ml

SCN3B  電壓門控鈉通道SCN3B蛋白抗體規格: 0.2ml

TIS11D/ERF2  表皮生長因子反應蛋白2抗體規格: 0.2ml

xCT/CCBR1  鈣離子通道阻端耐藥蛋白CCBR1抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。