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貨號(hào)	FS-X9541

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是采用分光光度法檢測(cè)細(xì)胞或組織裂解液中caspase 3酶活性或純化的caspase 3酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標(biāo)儀檢測(cè)或容量不超過100μl的分光光度檢測(cè)杯檢測(cè)時(shí)，除標(biāo)準(zhǔn)曲線外可以檢測(cè)20個(gè)樣品。

Caspase是一個(gè)在細(xì)胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也稱CPP32、Yama或apopain，有時(shí)被寫作caspase-3或caspase 3，屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily)，是細(xì)胞凋亡過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。Caspase 3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中研究多的一個(gè)caspase。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，并可以直接特異性剪切許多caspase底物，包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)，ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)，gelsolin和fodrin等。這些由caspase 3介導(dǎo)的蛋白剪切是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的重要組成部分。另外，caspase 3在細(xì)胞核凋亡過程中也起到了關(guān)鍵作用，包括染色質(zhì)固縮(chromatin condensention)，DNA片段化(DNA fragmentation)等。同時(shí)caspase 3對(duì)細(xì)胞起泡(cell blebbing)也起到關(guān)鍵作用。

本Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒是基于caspase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測(cè)定吸光度來檢測(cè)caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強(qiáng)吸收。

試劑盒中提供了caspase 3催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA，可以作為定量caspase 3酶活性的標(biāo)準(zhǔn)品。

試劑盒組分：

裂解液——————8ml

檢測(cè)緩沖液——————8ml

Ac-DEVD-pNA(2mM)———200μl

pNA(10mM)——————200μl

儲(chǔ)存條件：-20℃。

中文名稱：Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒

英文名稱：Caspase 3 Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20次|100次

貨號(hào)：FS-X9541

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

肝膠原凝集su1(CLL1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CLL1 ELISA Kit，CLL1，

干擾su調(diào)節(jié)因子1(IRF1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IRF1 ELISA Kit，IRF1，

鈣調(diào)蛋白樣蛋白5(CALML5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CALML5 ELISA Kit，CALML5，

輔meiQ10同源物B(COQ10B)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：COQ10B ELISA Kit，COQ10B，

分揀連接蛋白2(SNX2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SNX2 ELISA Kit，SNX2，

防御suβ118(DEFβ118)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DEFβ118 ELISA Kit，DEFβ118，

泛su(Ub)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Ub ELISA Kit，Ub，

耳椎蛋白90(OC90)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：OC90 ELISA Kit，OC90，

多巴an受體D4(DRD4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DRD4 ELISA Kit，DRD4，

電子轉(zhuǎn)移黃su蛋白β肽(ETFβ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ETFβ ELISA Kit，ETFβ，

人抗Scl-70抗體(Anti-Scl70)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Anti-Scl70 ELISA Kit，Anti-Scl70，

接觸蛋白3(CNTN3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CNTN3 ELISA Kit，CNTN3，

精氨suanmeiⅡ(Arg2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Arg2 ELISA Kit，Arg2，

腱蛋白(CHRD)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CHRD ELISA Kit，CHRD，

jia羥激mei(MVK)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MVK ELISA Kit，MVK，

激活suA受體Ⅰ(ACVR1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ACVR1 ELISA Kit，ACVR1，

肌原調(diào)節(jié)蛋白1(MYOZ1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MYOZ1 ELISA Kit，MYOZ1，
Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒fu康z(mì)uo相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

沙丁anchun相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:5mg 英文名稱：

lv喹相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

an碘tong相關(guān)物質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：Amiodarone Related Compound H

酒石suan氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:3g 英文名稱：Potassium Bitartrate (AS)

乳suan鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Sodium Lactate

卡芬相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Carprofen Related Compound A

伊立替康相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

西他zuo相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

貝那普利相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：