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實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。?
參數規格:
產品名稱:百日咳桿菌(BP)核酸檢測試劑盒
產品規格:50T
產品貨號:FS-P10444
產品分類:熒光PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
白靈菇生長條件: 25℃培養基: 0014提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no
假單孢菌屬菌種抑制PaSecA酶活;抗腸球菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0027生長條件: 28C
福氏志賀氏菌培養基: CM0051B 3 III 6,7...提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
-610℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
嗜鹽潮間帶桿菌潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群模式菌株: no水樣/上層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 821生長條件: 28℃
青霉培養基: 0013模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
川西氏菌培養基: 821南大西洋細菌水樣/深層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
茯苓食用菌模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 14生長條件: 28℃
F486模式菌株: no安全等級: 1種屬: Penicillium│viridicatum試驗雙望棱鏡提供形式: 凍干物培養基: 0089生長條件: 28℃
漢遜德巴利酵母共生微生物/魚類共生菌模式菌株: no生物樣/梭魚提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 513生長條件: 28℃
-611℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
螺卷毛殼生長條件: 26培養基: 14提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
木霉培養基: 14有抑制金黃色葡萄球菌Staphyloccocus aureus 作用土壤提供形式: 斜面培養物;凍干物模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
AS4.1611=ATCC27064=BCRC11518=CBS226.75=DSM40751=KCTC9095=NBRC13307模式菌株;基因組序列號:ABJH00000000,CM000913,CM001015;提取物能夠通過環化作用將乙酰-L-半胱氨酰-D-纈氨轉變為芐青霉素模式菌株: yes種屬: Streptomycesclavuligerus土壤安全等級: 1培養基: 158生長條件: 28℃
植物乳桿菌生長條件: 37℃培養基: 0006提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
GIM培養基: 13啤酒酵母種屬: SaccharomycescerevisiaeHansen安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃
基硅烷)甲基代烷 5-硝基噻吩-2-甲 2,5-二溴
甲基基硅烷 3,5-二甲基-4-羥基 蔗糖八乙酯
1-胺甲剛烷 3,5-二甲基-4-羥基甲 高效菊酯
1-羥乙剛烷 間溴三 二亞甲基甘乙酯
Glycine 甘 56-40-6
L(+)-Ascorbic acid 抗壞血 50-81-7
Fumaric acid 富馬 110-17-8
Poly-L-aspartic acid 聚天冬 25608-40-6
大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人信號傳導子及轉錄激活子5(STAT5)免疫試劑盒 human STAT5 ELISA Kit
醇脫氫酶(ADH)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
Ratmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISA試劑盒大鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒規格:96T/48T
Humanheafattyacidbindingprotein,h-FABPELISA試劑盒人心型脂肪結合蛋白(h-FABP)ELISA試劑盒規格:96T/48T
HumanleukocyteaigenC,HLA-CELISAKit人類白抗原C(HLA-C)ELISA試劑盒規格:96T/48T
百日咳桿菌(BP)核酸檢測試劑盒山梔苷甲酯64421-28-9英文名:Shanzhiside methylester
英文別名:Cyclopenta(C)pyran-4-carboxylic acid, 1-(beta-D-glucopyranosyloxy)-1,4A,5,6,7,7A-hexahydro-5,7-dihydroxy-7-methyl-, methyl ester, (1S-(1alpha,4aalpha,5alpha,7alpha,7aalpha))
登錄號:64421-28-9
分子式:C17H26O11
分子量:406.38
分子結構:
外觀:白色結晶
規格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:雙子葉植物唇形科*味 Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo. 的根及根狀莖或全草。
溶解性:易溶于水、和乙醇,難溶于,不溶于和。
熔點:131-133℃
藥理藥效:活血化淤、 抗菌消炎、 增強免疫力。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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